公告:新满多没有杂乱广告的网站, 请大家收藏!很好记,域名是 新满多 拼音!xinmanduo.com ! 更简洁好记的 ykyh.net

您的当前位置:首页 > 专利技术 > 正文 -- 手机或者平板访问

抗PD‑1的人抗体的专利技术

来源:未知 编辑:晚一步 时间:2017-11-23
技术领域本发明涉及特异性结合免疫调谐(immunomodulatory)受体程序性死亡-1(PD-1)的人抗体和人抗体的抗原结合片段,及使用那些抗体的治疗和诊断方法。

背景技术:
程序性死亡-1(PD-1)(也称CD279)是表达在活化T细胞和B细胞、天然杀伤细胞和单核细胞上的288个氨基酸的蛋白质受体。PD-1是CD28\/CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞抗原)\/ICOS(诱导型共刺激物)家族T细胞共抑制受体的成员(Chen等2013,Nat.Rev.Immunol.13:227-242)。PD-1的主要功能是减弱免疫反应(Riley2009,Immunol.Rev.229:114-125)。PD-1具有两个配体,PD-配体1(PD-L1)和PD-L2。PD-L1(CD274、B7H1)广泛表达在淋巴和非淋巴组织二者如CD4和CD8T细胞、巨噬细胞谱系细胞、外周组织上,以及肿瘤细胞、病毒感染细胞和自身免疫组织细胞上。PD-L2(CD273、B7-DC)具有比PD-L1更受限制的表达,表达在活化树突细胞和巨噬细胞上(Dong等1999,NatureMed.)。PD-L1在大多数人癌症中表达,包括黑素瘤、神经胶质瘤、非小细胞肺癌、头和颈鳞状细胞癌、白血病、胰腺癌、肾细胞癌和肝细胞癌,且在几乎所有癌症类型中都可以诱导(Zou和Chen2008,Nat.Rev.Immunol.8:467-77)。PD-1结合其配体导致T细胞增殖和细胞因子分泌减少,在诸如癌症、病毒感染和自身免疫病的疾病中使体液和细胞免疫反应受损。已在自身免疫、病毒和肿瘤免疫治疗中研究了阻断PD-1结合来逆转免疫抑制(Ribas2012,NEJM366:2517-2519;Watanabe等2012,Clin.Dev.Immunol.2012卷,文章ID:269756;Wang等2013,J.ViralHep.20:27-39)。T细胞共刺激和共抑制分子(统称共信号分子)在调节T细胞活化、亚型分化、效应子功能和存活中发挥至关重要的作用(Chen等2013,NatureRev.Immunol.13:227-242)。在通过T细胞受体识别抗原呈递细胞上的关联肽-MHC复合体后,共信号受体与T细胞受体共定位在免疫突触处,在免疫突触中,它们与TCR信号发放协同作用,以促进或抑制T细胞活化和功能(Flies等2011,YaleJ.Biol.Med.84:409-421)。最终的免疫反应受共刺激和共抑制信号之间的平衡调节(“免疫检验点”)(Pardoll2012,Nature12:252-264)。PD-1作为一个这种“免疫检验点”在介导外周T细胞耐受中及避免自身免疫中发挥作用。PD-1结合PD-L1或PD-L2,并抑制T细胞活化。慢性病毒感染和肿瘤利用PD1抑制T细胞活化的能力来逃避免疫反应。在慢性病毒感染中,PD-1在病毒特异性T细胞上高表达,这些T细胞变得“衰竭”,丧失效应子功能和增殖能力(Freeman2008,PNAS105:10275-10276)。PD-L1在多种肿瘤上表达,动物模型上的研究已显示,肿瘤上的PD-L1抑制T细胞活化和肿瘤细胞裂解,并可导致肿瘤特异性T细胞的死亡增加。PD-1:PD-L1系统还在诱导型T调节(Treg)细胞发育中及维持Treg功能中发挥重要作用(Francisco等2010,Immunol.Rev.236:219-242)。由于PD-1在自身免疫、肿瘤免疫和感染免疫中发挥重要作用,所以它是理想的免疫治疗靶点。已在癌症和慢性病毒感染的治疗中研究了用包括单克隆抗体的拮抗剂阻断PD-1(Sheridan2012,NatureBiotechnology30:729-730)。抗PD-1的单克隆抗体为本领域已知,并描述于例如美国专利\/公开号8008449、8168757、20110008369、20130017199、20130022595中,及WO2006121168、WO20091154335、WO2012145493、WO2013014668、WO2009101611、EP2262837和EP2504028中。发明概述本发明提供结合PD-1的抗体及其抗原结合片段。本发明的抗体尤其用于靶向表达PD-1的T细胞,及用于调节PD-1活性。在某些实施方案中,本发明的抗体用于抑制或中和PD-1活性和\/或用于刺激T细胞活化,例如在T细胞介导的杀伤有益或希望得到的情况下。在备选实施方案中,该抗体增强PD-1结合和\/或活性,并可用于抑制T细胞活化。本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分可以作为多特异性抗原结合分子的部分包括,例如,以调节免疫反应和\/或将该抗体靶向至特定细胞类型,如肿瘤细胞、自身免疫组织细胞或病毒感染细胞。该抗体用于治疗疾病或障碍,如癌症、病毒感染和自身免疫病。本发明的抗体可以是全长(例如,IgG1或IgG4抗体)或可以仅包含抗原结合部分(例如,Fab、F(ab’)2或scFv片段),且可以修饰以影响功能性,例如,以消除残留效应子功能(Reddy等,2000,J.Immunol.164:1925-1933)。在某些实施方案中,该抗体可以是双特异性抗体。在第一方面,本发明提供特异性结合PD-1的分离的重组单克隆抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中,该抗体是全人抗体。本发明的示例性抗PD-1抗体在本文表1-3中列出。表1显示示例性抗PD-1抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识号。表2显示示例性抗PD-1抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识号。表3显示示例性抗PD-1抗体的重链和轻链序列的氨基酸序列标识号。本发明提供抗体或其抗原结合片段,其包含选自表1中所列任意HCVR氨基酸序列的氨基酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含选自表1中所列任意LCVR氨基酸序列的氨基酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR\/LCVR),该HCVR\/LCVR含有与表1中所列任意LCVR氨基酸序列配对的表1中所列任意HCVR氨基酸序列。根据某些实施方案,本发明提供抗体或其抗原结合片段,其含有包含在表1中所列任意示例性抗PD-1抗体内的HCVR\/LCVR氨基酸序列对。在某些实施方案中,该HCVR\/LCVR氨基酸序列对选自SEQIDNO:2\/10、18\/26、34\/42、50\/58、66\/74、82\/90、98\/106、114\/122、130\/138、146\/154、162\/170、178\/186、194\/202、210\/202、218\/202、226\/202、234\/202、242\/202、250\/202、258\/202、266\/202、274\/202、282\/202、290\/202、298\/186、306\/186和314\/186。在某些实施方案中,该HCVR\/LCVR氨基酸序列对选自SEQIDNO:130\/138(例如H2M7795N)、162\/170(例如H2M7798N)、234\/202(例如H4xH9048P)或314\/186(例如H4xH9008P)。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含重链CDR1(HCDR1),该HCDR1含有选自表1中所列任意HCDR1氨基酸序列的氨基酸序列,或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含重链CDR2(HCDR2),该HCDR2含有选自表1中所列任意HCDR2氨基酸序列的氨基酸序列,或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含重链CDR3(HCDR3),该HCDR3含有选自表1中所列任意HCDR3氨基酸序列的氨基酸序列,或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含轻链CDR1(LCDR1),该LCDR1含有选自表1中所列任意LCDR1氨基酸序列的氨基酸序列,或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含轻链CDR2(LCDR2),该LCDR2含有选自表1中所列任意LCDR2氨基酸序列的氨基酸序列,或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含轻链CDR3(LCDR3),该LCDR3含有选自表1中所列任意LCDR3氨基酸序列的氨基酸序列,或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3\/LCDR3),该HCDR3\/LCDR3含有与表1中所列任意LCDR3氨基酸序列配对的表1中所列任意HCDR3氨基酸序列。根据某些实施方案,本发明提供抗体或其抗原结合片段,其含有包含在表1中所列任意示例性抗PD-1抗体内的HCDR3\/LCDR3氨基酸序列对。在某些实施方案中,该HCDR3\/LCDR3氨基酸序列对选自SEQIDNO:136\/144(例如H2M7795N)、168\/176(例如H2M7798N)、240\/208(例如H4xH9048P)和320\/192(例如H4xH9008P)。本发明提供抗体或其抗原结合片段,其包含重链,该重链含有选自表3中所列任意HC氨基酸序列的氨基酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含轻链,该轻链含有选自表3中所列任意LC氨基酸序列的氨基酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其包含HC和LC氨基酸序列对(HC\/LC),该HC\/LC含有与表3中所列任意LC氨基酸序列配对的表3中所列任意HC氨基酸序列。根据某些实施方案,本发明提供抗体或其抗原结合片段,其含有包含在表3中所列任意示例性抗PD-1抗体内的HC\/LC氨基酸序列对。在某些实施方案中,该HC\/LC氨基酸序列对选自SEQIDNO:330\/331、332\/333、334\/335和336\/337。本发明还提供抗体或其抗原结合片段,其含有包含在表1中所列任意示例性抗PD-1抗体中的一组6个CDR(即HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。在某些实施方案中,该HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列选自SEQIDNO:132-134-136-140-142-144(例如H2M7795N)、164-166-168-172-174-176(例如H2M7798N)、236-238-240-204-206-208(例如H4xH9048P)和316-318-320-188-190-192(例如H4xH9008P)。在相关实施方案中,本发明提供抗体或其抗原结合片段,其含有包含在表1中所列任意示例性抗PD-1抗体所定义的HCVR\/LCVR氨基酸序列对内的一组6个CDR(即HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。例如,本发明包括抗体或其抗原结合片段,其含有包含在选自SEQIDNO:130\/138(例如H2M7795N)、162\/170(例如H2M7798N)、234\/202(例如H4xH9048P)和314\/186(例如H4xH9008P)的HCVR\/LCVR氨基酸序列对内的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术为本领域公知,并可用于鉴定本文公开的指定HCVR和\/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可用于鉴定CDR边界的示例性惯例包括,例如,Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般而言,Kabat定义基于序列变异性,Chothia定义基于结构环区的位置,AbM定义是Kabat法和Chothia法之间的折衷。参见例如Kabat,\SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,\NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1991);Al-Lazikani等,J.Mol.Biol.273:927-948(1997);及Martin等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:9268-9272(1989)。公开数据库也可用于鉴定抗体内的CDR序列。本发明包括具有修饰的糖基化模式的抗PD-1抗体。在一些实施方案中,可以使用去除不希望得到的糖基化位点的修饰,或缺乏存在于寡糖链上的岩藻糖部分的抗体,以提高依赖抗体的细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等(2002)JBC277:26733)。在其他应用中,可以进行糖基化修饰来改变依赖补体的细胞毒性(CDC)。本发明还提供与包含HCVR的CDR和LCVR的CDR的抗体或其抗原结合片段竞争特异性结合PD-1的抗体及其抗原结合片段,其中该HCVR和LCVR各具有选自表1中所列HCVR和LCVR序列的氨基酸序列。本发明还提供阻断PD-1与PD-L1或PD-L2结合的分离的抗体及其抗原结合片段。在一些实施方案中,阻断PD-1与PD-L1结合的抗体或其抗原结合片段可以结合与PD-L1相同的PD-1上的表位,或者可以结合与PD-L1不同的PD-1上的表位。在备选实施方案中,本发明提供刺激PD-1与PD-L1结合的抗体及其抗原结合片段。在某些实施方案中,本发明提供结合PD-1的分离的抗体或其抗原结合片段,其中该抗体或其抗原结合片段增强PD-1与PD-L1的结合。在一些实施方案中,该分离的抗体或其抗原结合片段包含:HCVR的CDR,其中该HCVR具有选自SEQIDNO:2、98和250的氨基酸序列;LCVR的CDR,其中该LCVR具有选自SEQIDNO:10、106和202的氨基酸序列。在一些实施方案中,该分离的抗体或其抗原结合片段包含选自SEQIDNO:2\/10(例如H1M7789N)、98\/106(例如H2M7791N)和250\/202(例如H4H9068P2)的HCVR\/LCVR氨基酸序列对。本发明还提供特异性结合来自人或其他物种的PD-1的抗体及其抗原结合片段。在某些实施方案中,该抗体可以结合人PD-1和\/或结合猕猴(cynomolgus)PD-1。本发明还提供与包含HCVR的CDR和LCVR的CDR的参考抗体或其抗原结合片段交叉竞争结合PD-1的抗体及其抗原结合片段,其中该HCVR和LCVR各具有选自表1中所列HCVR和LCVR序列的氨基酸序列。在一个实施方案中,本发明提供具有一种或多种以下特征的分离的抗体或其抗原结合片段:(a)阻断PD-1与PD-L1或PD-L2的结合;(b)特异性结合人PD-1和\/或猕猴PD-1;(c)阻断PD-1诱导的T细胞下调和挽救T细胞信号发放;(d)在患有结肠癌的个体中抑制肿瘤生长和增加存活期;(e)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中抑制T细胞增殖;和(f)在MLR测定中增加IL-2和\/或干扰素-γ分泌。在一些实施方案中,该抗体或其抗原结合片段可以以激动剂方式特异性结合PD-1,即它可以增强或刺激PD-1结合和\/或活性;在其他实施方案中,该抗体可以以拮抗剂方式特异性结合PD-1,即它可以阻断PD-1与其配体结合。在某些实施方案中,本发明的抗体或抗原结合片段是双特异性的,其包含对PD-1的第一结合特异性和对第二靶表位的第二结合特异性。该第二靶表位可以是PD-1上或不同蛋白质上的另一表位。在某些实施方案中,该靶表位可以在不同的细胞上,包括在不同的T细胞、B细胞、肿瘤细胞、自身免疫组织细胞或病毒感染细胞上。在第二方面,本发明提供编码抗PD-1抗体或其部分的核酸分子。例如,本发明提供编码表1中所列任意HCVR氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意HCVR核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意LCVR氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意LCVR核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意HCDR1氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意HCDR1核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意HCDR2氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意HCDR2核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意HCDR3氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意HCDR3核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意LCDR1氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意LCDR1核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意LCDR2氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意LCDR2核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码表1中所列任意LCDR3氨基酸序列的核酸分子;在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意LCDR3核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。本发明还提供编码HCVR的核酸分子,其中该HCVR包含一组3个CDR(即HCDR1-HCDR2-HCDR3),其中该HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列组如表1中所列任意示例性抗PD-1抗体所定义。本发明还提供编码LCVR的核酸分子,其中该LCVR包含一组3个CDR(即LCDR1-LCDR2-LCDR3),其中该LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组如表1中所列任意示例性抗PD-1抗体所定义。本发明还提供编码HCVR和LCVR二者的核酸分子,其中该HCVR包含表1中所列任意HCVR氨基酸序列的氨基酸序列,其中该LCVR包含表1中所列任意LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施方案中,该核酸分子包含选自表2中所列任意HCVR核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列,及选自表2中所列任意LCVR核酸序列的多核苷酸序列,或与之具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本相似的序列。在本发明的此方面的某些实施方案中,该核酸分子编码HCVR和LCVR,其中该HCVR和LCVR都源自表1中所列的同一抗PD-1抗体。本发明提供编码表3中所列任意重链氨基酸序列的核酸分子。本发明还提供编码表3中所列任意轻链氨基酸序列的核酸分子。本发明还提供编码重链(HC)和轻链(LC)二者的核酸分子,其中该HC包含表3中所列任意HC氨基酸序列的氨基酸序列,其中该LC包含表3中所列任意LC氨基酸序列的氨基酸序列。在相关方面,本发明提供能够表达含有抗PD-1抗体的重链或轻链可变区的多肽的重组表达载体。例如,本发明包括重组表达载体,其包含上述任意核酸分子,即编码表1中所示任意HCVR、LCVR和\/或CDR序列的核酸分子。本发明还提供能够表达含有抗PD-1抗体的重链或轻链的多肽的重组表达载体。例如,本发明包括重组表达载体,其包含上述任意核酸分子,即编码表3中所示任意重链或轻链序列的核酸分子。已引入这类载体的宿主细胞、以及通过在允许产生抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞并回收这样产生的抗体和抗体片段来产生抗体或其部分的方法也包括在本发明的范围之内。在第三方面,本发明提供多特异性抗原结合分子及其抗原结合片段,其包含特异性结合PD-1的第一抗原结合特异性,及特异性结合选自肿瘤细胞特异性抗原、自身免疫组织特异性抗原、感染细胞特异性抗原、T细胞共抑制物、T细胞受体、Fc受体、PD-L1和PD-1的抗原的第二抗原结合特异性。在某些实施方案中,该第一抗原结合特异性可以包含源自HCVR的三个CDR,该HCVR具有选自表1中的HCVR序列的氨基酸序列,及源自LCVR的三个CDR,该LCVR具有选自表1中的LCVR序列的氨基酸序列。在一个实施方案中,该第一抗原结合特异性可以包含PD-L1的胞外域。该第二抗原结合特异性可以靶向与PD-1相同的细胞上或同一组织类型或不同组织类型的不同细胞上的抗原。例如,该多特异性抗原结合分子可以结合T细胞,其中该第一抗原结合特异性可以特异性结合PD-1,而该第二抗原结合特异性可以结合T细胞上的T细胞受体。备选地,在另一实施方案中,该第一抗原结合特异性可以特异性结合T细胞上的PD-1,而该第二抗原结合特异性可以靶向B细胞或巨噬细胞或抗原呈递细胞上的抗原\/受体。在某些实施方案中,该第二抗原结合特异性可以针对自身免疫组织相关抗原。在一个实施方案中,该第一抗原结合特异性可以包含PD-L1的胞外域,而该第二抗原结合特异性可以结合PD-1上的另一表位。在某些实施方案中,该第一抗原结合特异性以较低亲和力特异性结合PD-1,例如以超过10-7M、超过10-6M、超过10-5M或超过10-4M的KD。在第四方面,本发明提供包含特异性结合PD-1的重组人抗体或其片段和可药用载体的药物组合物。在相关方面,本发明涉及组合物,其是抗PD-1抗体和第二治疗剂的组合。在一个实施方案中,该第二治疗剂是有利地与抗PD-1抗体组合的任意治疗剂。可以有利地与抗PD-1抗体组合的示例性治疗剂非限制性地包括:其他结合和\/或调节PD-1信号发放的治疗剂(包括其他抗体或其抗原结合片段等),和\/或不直接结合PD-1但调节免疫细胞活化的治疗剂。涉及本发明的抗PD-1抗体的其他联合治疗和共同制剂(co-formulation)在本文中其他地方公开。在第五方面,本发明提供调节个体中的免疫反应的方法,该方法包括对有需要的个体施用治疗有效量的本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中,本发明提供增强个体中的免疫反应的方法,该方法包括对该个体施用有效量的本发明的结合PD-1并阻断PD-1与PD-L1结合的抗体或其片段。在一个实施方案中,本发明提供刺激或增强个体中的T细胞刺激的方法。在一个实施方案中,本发明提供抑制个体中的T调节(Treg)细胞的方法,该方法包括对有需要的个体施用治疗有效量的本发明的阻断抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中,该有需要的个体患有诸如癌症或病毒感染的疾病或障碍。在备选实施方案中,本发明提供抑制或阻抑个体中的T细胞活化的方法,该方法包括对有需要的个体施用治疗有效量的本发明的激活抗体或其片段。在一个实施方案中,该个体可以患有自身免疫疾病或障碍。在第六方面,本发明提供用本发明的抗PD-1抗体或抗体的抗原结合部分在个体中治疗诸如癌症、自身免疫病或病毒感染的疾病或障碍的治疗方法,其中该治疗方法包括对有需要的个体施用治疗有效量的包含本发明的抗体或抗体片段的药物组合物。所治疗的障碍是通过刺激或抑制PD-1活性或信号发放而得到改善、好转、抑制或阻止的任意疾病或病症。在某些实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段与第二治疗剂组合对有需要的个体施用。该第二治疗剂可以选自抗另一T细胞共抑制物的抗体、抗肿瘤细胞抗原的抗体、抗T细胞受体的抗体、抗Fc受体的抗体、抗病毒感染细胞上的表位的抗体、抗自身免疫组织抗原的抗体、抗PD-L1的抗体、细胞毒剂、抗癌药、抗病毒药、抗炎药(例如糖皮质激素)、化疗剂、放疗、免疫抑制剂及本领域已知的任意其他药物或治疗。在某些实施方案中,该第二治疗剂可以是帮助对抗或减少与本发明的抗体或其抗原结合片段相关的任何可能的副作用(如果存在这类副作用)的治疗剂。在某些实施方案中,本发明提供用于抑制肿瘤生长的方法。在某些实施方案中,本发明提供增强癌症患者的存活的方法。癌症的实例包括但不限于原发性和\/或复发性癌症,包括脑癌(例如多形性成胶质细胞瘤)、肺癌(例如非小细胞肺癌)、头和颈鳞状细胞癌、肾细胞癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、前列腺癌和结肠癌。该方法包括与选自血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂(例如阿柏西普(aflibercept)、贝伐单抗(bevacizumab))、血管生成素-2(Ang2)抑制剂(例如抗Ang2抗体,如nesvacumab)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)抑制剂(例如伊匹单抗(ipilimumab))、化疗剂和放疗的第二治疗剂组合,施用包含治疗有效量的本发明的抗PD-1抗体的药物组合物。可以与本发明的抗PD-1抗体组合使用,用于治疗癌症的其他治疗\/治疗剂的其他实例在本文中其他地方描述。抗体或其片段可以皮下、静脉内、皮内、腹腔内、口服、肌内或颅内施用。抗体或其片段可以按约0.1mg\/kg个体体重至约100mg\/kg个体体重的剂量施用。本发明还包括本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗可从阻断或增强PD-1结合和\/或信号发放受益的疾病或障碍的药物中的用途。其他实施方案将从随后的发明详述的浏览变得显而易见。附图简述图1是本文实施例8中所述基于萤光素酶的PD-1生物测定的示意图。A:失活Jurkat细胞;图B:通过CD3xCD20双特异性抗体使T细胞受体(TCR)成簇来活化Jurkat细胞;图C:PD-1激活减弱了活化Jurkat细胞中的反应;图D:阻断PD-1挽救了活化Jurkat细胞中的反应。图2显示在第0天植入Colon-26肿瘤细胞并在第3、6、10、13和19天通过注射来用所示分子组合治疗的小鼠(“早期治疗肿瘤模型”)的肿瘤生长和存活结果。图表显示不同实验组在植入后多种时间点的肿瘤体积(mm3)。沿X轴向上的箭头指示治疗注射的时间。“mIgG2a”是IgG2同种型对照;“Fc”是人Fc对照;“VEGFTrap”是阿柏西普;“抗PD-1”是抗小鼠PD-1克隆RPMI-14;“抗PD-L1”是本文中其他地方所述的抗PD-L1单克隆抗体。图3显示在第0天植入Colon-26肿瘤细胞并在第3、6、10、13和19天通过注射来用所示分子组合治疗的小鼠(“早期治疗肿瘤模型”)的肿瘤生长和存活结果。图表显示各实验组中的单只小鼠在植入后第28天的肿瘤体积(mm3)。“mIgG2a”是IgG2同种型对照;“Fc”是人Fc对照;“VEGFTrap”是阿柏西普;“抗PD-1”是抗小鼠PD-1克隆RPMI-14;“抗PD-L1”是本文中其他地方所述的抗PD-L1单克隆抗体。发明详述在描述本方法之前,应理解,本发明不限于所描述的具体方法和实验条件,因为这类方法和条件可以变动。还应理解,本文所用的术语仅是为了描述具体实施方案的目的,并非旨在限制,因为本发明的范围将仅受限于所附权利要求。除非另有定义,本文中所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。虽然与本文中所述的那些相似或等同的任何方法和材料都可以用于实施或测试本发明,但现在描述优选的方法和材料。本文中提到的所有出版物在此以其整体引入作为参考。术语“PD-1”指T细胞共抑制物程序性死亡-1蛋白质,也称为CD279。全长PD-1的氨基酸序列在GenBank中作为检索号NP_005009.2提供,在本文中也称为SEQIDNO:327。术语“PD-1”还包括具有氨基酸序列SEQIDNO:321、322、323或324的PD-1蛋白质变体。术语“PD-1”包括重组PD-1或其片段。该术语还涵盖与例如组氨酸标记、小鼠或人Fc或信号序列如ROR1偶联的PD-1或其片段。例如,该术语包括SEQIDNO:323或324所示例的序列,其在C端包含小鼠Fc(mIgG2a)或人Fc(hIgG1),与具有C93S改变的全长PD-1的氨基酸残基25-170偶联。SEQIDNO:321所示例的蛋白质变体在C端包含组氨酸标记,与全长PD-1的氨基酸残基25-170偶联。除非指定为来自非人物种,术语“PD-1”指人PD-1。PD-1是CD28\/CTLA-4\/ICOS家族T细胞共抑制物的成员。PD-1是288个氨基酸的蛋白质,具有IgV样胞外N端结构域、跨膜结构域及含有基于免疫受体酪氨酸的抑制(ITIM)基序和基于免疫受体酪氨酸的转换(ITSM)基序的胞内结构域(Chattopadhyay等2009,Immunol.Rev.)。PD-1受体具有两个配体,PD-配体-1(PD-L1)和PD-L2。术语“PD-L1”指PD-1受体的也称为CD274和B7H1的配体。全长PD-L1的氨基酸序列在GenBank中以检索号NP_054862.1提供,在本文中也称为SEQIDNO:328。该术语还涵盖与例如组氨酸标记、小鼠或人Fc或信号序列如ROR1偶联的PD-L1或其片段。例如,该术语包括SEQIDNO:325或326所示例的序列,其在C端包含小鼠Fc(mIgG2a)或人Fc(hIgG1),与全长PD-L1的氨基酸残基19-239偶联。PD-L1是290个氨基酸的蛋白质,具有胞外IgV样结构域、跨膜结构域和高度保守的约30个氨基酸的胞内结构域。PD-L1组成性表达在许多细胞如抗原呈递细胞(例如树突细胞、巨噬细胞和B细胞)上和造血及非造血细胞(例如血管内皮细胞、胰岛和特免位点)上。PD-L1还表达在多种肿瘤、病毒感染细胞和自身免疫组织上,且是免疫抑制环境的成分(Ribas2012,NEJM366:2517-2519)。本文所用的术语“T细胞共抑制物”指通过T细胞活化或抑制来调节免疫反应的配体和\/或受体。术语“T细胞共抑制物”(也称为T细胞共信号发放分子)包括但不限于淋巴细胞活化基因3蛋白质(LAG-3,也称为CD223)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)、B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)、CD-28、2B4、LY108、T细胞免疫球蛋白和黏蛋白3(TIM3)、具有免疫球蛋白和ITIM的T细胞免疫受体(TIGIT;也称为VSIG9)、白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR1;也称为CD305)、诱导型T细胞共刺激物(ICOS;也称为CD278)、T细胞活化的V-结构域Ig抑制因子(VISTA)和CD160。本文所用的术语“Fc受体”指见于包括B淋巴细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞上的表面受体蛋白质,其对抗体的F区具有结合特异性。术语“Fc受体”包括但不限于Fcγ受体[例如FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16a)和FcγRIIIB(CD16b)]、Fcα受体(例如FcαRI或CD89)和Fcε受体[例如FcεRI和FcεRII(CD23)]。本文所用的术语“抗体”旨在指包含四条多肽链(通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链)的免疫球蛋白分子(即“全抗体分子”),以及其多聚体(例如IgM)或其抗原结合片段。每条重链包含重链可变区(“HCVR”或“VH”)和重链恒定区(包含结构域CH1、CH2和CH3)。每条轻链包含轻链可变区(“LCVR”或“VL”)和轻链恒定区(CL)。VH和VL区可以进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区,其中嵌入称为构架区(FR)的更保守的区域。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR,从氨基端至羧基端按以下顺序排列:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的某些实施方案中,抗体(或其抗原结合片段)的FR可以与人种系序列相同,或者可以是天然修饰或人工修饰的。可以根据两个或多个CDR的并排比较来定义氨基酸共有序列。也可能取代一个或多个CDR残基或删去一个或多个CDR残基。科学文献中已描述了对结合而言可省去其中一个或两个CDR的抗体。Padlan等(1995FASEBJ.9:133-139)根据公开的晶体结构分析了抗体与其抗原之间的接触区,并得出结论,只有约五分之一至三分之一的CDR残基实际上接触抗原。Padlan还发现其中一个或两个CDR没有氨基酸与抗原接触的许多抗体(还参见Vajdos等2002JMolBiol320:415-428)。可以根据之前的研究(例如CDRH2中的残基H60-H65常不需要)、从处于ChothiaCDR之外的KabatCDR区域、通过分子模拟和\/或凭经验鉴定不接触抗原的CDR残基。如果删去CDR或其一个或多个残基,通常用在另一人抗体序列或这种序列的共有序列中占据相应位置的氨基酸取代。也可以凭经验选择CDR内的取代位置和取代的氨基酸。经验取代可以是保守或非保守取代。与相应的种系序列相比,本文公开的全人抗PD-1单克隆抗体可以在重链和轻链可变结构域的构架和\/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和\/或缺失。这类突变可以通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体