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用于增强萌发的组合物和专利与流程

来源:未知 编辑:晚一步 时间:2018-02-22

披露了包括一种或多种微生物和一种或多种萌发剂(germinant)的组合物,连同用一种或多种微生物和一种或多种萌发剂处理植物或植物部分的方法。

背景

植物生长至少部分取决于植物和栖息于周围土壤的微生物之间的相互作用。不断探索生物溶液以增强植物生长、健康和活力;并且这些溶液典型地利用了在植物与微生物之间的某种生物关系。已经使用生物溶液,除其他事项之外,以促进植物生长,抗击植物病原体,减少用于土壤肥力和有害生物管理的化学药品的使用,并且增加养分有效性以及植物的吸收。尽管已知这些化学药品中的一些具有负面的环境和人类健康问题,尽管如此,此类化学试剂由于它们对重大真菌疾病的强烈的活性、以及环境上更安全和有效的替代物的有限可用性仍继续广泛使用。

一般来说,优选生物溶液远超过传统合成化学防治法,因为生物溶液对植物宿主或环境几乎不或不会造成损伤,并且一些可以有利于正常植物发育。然而,生物溶液有时可能受限于它们在它们赋予的补救中的效力范围,或受限于它们在实际现场条件下和在处理应用期间的存活能力。

通过使用某些微生物已经尝试使用生物溶液来控制植物真菌疾病。具体地,出于此目的,已经使用了芽胞杆菌属细菌的物种。

例如,美国专利号5,589,381描述了具有抑制某些植物病原体能力的地衣芽孢杆菌菌株PR1-36a。

美国专利号6,060,051描述了展现出杀虫、抗真菌和抗菌活性的、产抗生素的和产代谢物的枯草芽孢杆菌菌株。还描述了保护或处理植物避免真菌和细菌感染以及玉米根虫侵染的方法,该方法包括如下步骤:向植物施用有效量的产抗生素\/产代谢物的枯草芽孢杆菌菌株,该抗生素\/代谢物由新颖的枯草芽孢杆菌菌株或其组合产生。

尽管如此,应用某些活的生物有机体的努力已经大大受限于这些菌株不足以在最低限度碳源基质(例如,叶面施用生物防治生物后的植物叶子)上萌发的能力。由于保持在休眠孢子状态,此类生物不能进行其有益的作用模式。此类孢子的萌发将使得生物能够恢复代谢活性,并且从而增加这些生物溶液的效率。因此,对在农业中增强生物溶液效力的环境安全且有效的溶液存在着长期以来感受到的、超过了当今使用的危险化学品的需求。

概述

在此描述了包括一种或多种微生物和一种或多种萌发剂的组合物,连同包括施用这些组合物以促进该一种或多种微生物在非最优微生物生长底物上较快萌发的方法,具体的是叶面施用。

在一个实施例中,在此描述的组合物包括载体、一种或多种细菌、和一种或多种萌发剂。在具体的方面,该一种或多种细菌是处于孢子形式。该一种或多种萌发剂可以包括能够诱导微生物孢子萌发的任何物质。

在另一个实施例中,该组合物进一步包括一种或多种农业上有益的成分,例如一种或多种生物活性成分、一种或多种微量营养素、一种或多种生物刺激剂、一种或多种防腐剂、一种或多种聚合物、一种或多种润湿剂、一种或多种表面活性剂、一种或多种除草剂、一种或多种杀真菌剂、一种或多种杀昆虫剂、一种或多种肥料、或其组合。

在一个实施例中,在此描述的组合物进一步包括一种或多种生物活性成分。生物活性成分可以包括一种或多种植物信号分子。在具体实施例中,该一种或多种生物活性成分可以包括一种或多种脂壳寡糖(lipo-chitooligosaccharide)(LCO)、一种或多种壳寡糖(CO)、一种或多种几丁质化合物、一种或多种结瘤基因诱导物(例如,类黄酮和非类黄酮结瘤基因诱导物)及其衍生物、一种或多种卡里金(karrikin)及其衍生物、或其任何信号分子组合。

在此进一步描述了向植物或植物部分施用一种或多种微生物的方法,该方法包括将植物或植物部分与一种或多种微生物和一种或多种萌发剂接触。该一种或多种微生物可以包括具有一种或多种植物生长促进特性的细菌。可以将该一种或多种微生物与一种或多种萌发剂同时的或顺序施用。

该方法可以进一步包括使该植物或植物部分经受与该一种或多种微生物或一种或多种萌发剂同时或顺序施用的一种或多种农业上有益的成分。该一种或多种农业上有益的成分可以包括一种或多种生物活性成分、一种或多种微量营养素、一种或多种生物刺激剂或其组合。在一个实施例中,该方法进一步包括使该植物或植物部分经受一种或多种生物活性成分。生物活性成分可以包括一种或多种植物信号分子。在具体实施例中,该一种或多种生物活性成分可以包括一种或多种LCO、一种或多种几丁质化合物、一种或多种CO、一种或多种结瘤基因诱导物(例如,类黄酮和非类黄酮结瘤基因诱导物)及其衍生物、一种或多种卡里金及其衍生物、或其任何信号分子组合。

在此处描述的特定实施例中,是用于诱导微生物萌发的方法,该方法包括向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂,其中当向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂后,相比于单独(即,没有一种或多种萌发剂)向植物或植物部分经叶面施用微生物孢子,该一种或多种微生物孢子展现出了在植物或植物部分上增加的萌发。在更具体的实施例中,该方法包括向植物叶面施用一种或多种细菌孢子和一种或多种萌发剂。该方法可以进一步包括使该植物或植物部分经受与该一种或多种细菌孢子或一种或多种萌发剂同时或顺序施用的一种或多种农业上有益的成分。

在再另一个实施例中,是用在此描述的组合物包衣种子的方法。

在再又另一个实施例中,是用在此描述的组合物中的一种或多种处理土壤的方法。

详细说明

披露的实施例涉及用于增强植物生长的组合物和方法。

定义:<\/u>

如在此所使用的,单数形式“一个”、“一种”和“该”旨在也包括复数形式,除非上下文清楚地另外指明。

如在此使用的,术语“一种或多种杀螨剂”意指能够对螨是有毒的、控制螨、杀死螨、抑制螨的生长、和\/或抑制螨的繁殖的任何试剂或试剂组合。

如在此所使用,术语“一种或多种农业上有益的成分”意指能够在农业中导致或提供有益的和\/或有用的效果的任何试剂或试剂组合。

如在此所使用,术语“一种或多种微生物”、“有益微生物”、“有益细菌”、等等,意指具有一种或多种有益特性(例如,产生一种或多种在此描述的植物信号分子、增强营养素和水的吸收、促进和\/或增强固氮作用、增强生长、增强种子萌发、增强出苗、增加种子数量或大小、打破植物的休眠或静止等)的任何微生物(例如,细菌、真菌、等等,或其组合)。

如在此所使用,“一种或多种生物活性剂”意指任何生物学有机体或化学元素、分子、或化合物、或其混合物,该一种或多种生物活性剂在种子、植物、或植物部分中具有生物活性(例如,植物信号分子,其他微生物、葡糖酸内酯、谷胱甘肽、等)。“生物活性”的非限制性实例包括N2<\/sub>固定、磷酸盐溶解、植物生长增强、生物杀有害生物活性、生物杀真菌活性、等等。

如在此所使用,术语“一种或多种生物刺激剂”意指能够增强植物和土壤内的代谢或生理过程的任何试剂或试剂组合。

如在此所使用,术语“载体”意指“农艺学上可接受的载体”。“农艺学上可接受的载体”意指可以用于将活性物(例如,在此描述的微生物、萌发剂、一种或多种农业上有益的成分、一种或多种生物活性成分等)递送至植物或植物部分(例如,植物叶)的任何材料,并且优选地,该载体可被施用(至植物、植物部分(例如,叶、种子)、或土壤)而对植物生长、土壤结构、土壤排水或类似的不具有不良作用。

如在此使用,术语“土壤可兼容的载体”意指可以添加至土壤,而不引起\/不具有植物生长、土壤结构、土壤排水等的有害影响的任何材料。

如在此所使用的,术语“种子可兼容的载体”意指可以在对种子、由种子长成的植物、种子萌发等不导致\/不具有不良作用的情况下被添加至种子中的任何材料。

如在此所使用,术语“叶可兼容的载体”意指可以在对植物、植物部分、植物生长、植物健康等不导致\/不具有不良作用的情况下被添加至植物或植物部分中的任何材料。

如在此使用的,术语“有效量”、“有效浓度”、或“有效剂量”意指一种或多种萌发剂的足以诱导一种或多种微生物萌发的量、浓度、或剂量。实际的有效剂量(以绝对值计)取决于以下因素,这些因素包括但不限于:可以增强或降低一种或多种萌发剂的萌发效果的其他活性或惰性成分之间的协同或拮抗相互作用,以及该一种或多种萌发剂在组合物中和\/或作为植物或植物部分处理剂的稳定性。可以例如通过常规的剂量反应实验确定一种或多种萌发剂的“有效量”、“有效浓度”或“有效剂量”。

如在此所使用,可以互换使用的术语“增强的植物生长”、“增加的植物生长”、“植物生长增强”、或“植物生长的增强”意指增加的植物产量(例如,可以通过每英亩的蒲式耳数测量的增加的生物质、增加的果实数、增加的棉铃、增加的种子数或大小、或其组合)、增加的根数量、增加的根质量、增加的根体积、增加的叶面积、增加的植物直立、增加的植物活力、更快的出苗(即,增强的出苗)、更快的萌发(即,增强的萌发)、或其组合。

如在此所使用,该术语“叶”意指植物在地面上的所有部位和器官。非限制性实例包括叶、针叶、秆、茎、花、子实体、果实等。如在此所使用,术语“叶面施用”、“经叶面施用”、及其变体旨在包括向植物的叶面或地上部分(例如,植物的叶)施用活性成分。施用可以通过本领域中已知的任何手段(例如,喷雾活性成分)来实现。

在此使用的,术语“一种或多种杀真菌剂”意指能够对真菌是有毒的、控制真菌、杀死真菌、抑制真菌的生长、和\/或抑制真菌的繁殖的任何试剂或试剂组合。

在此使用的,术语“一种或多种萌发剂”意指诱导微生物孢子萌发的任何物质或化合物(例如,诱导微生物孢子萌发的物质或化合物,例如细菌孢子)。

在此使用的,术语“一种或多种除草剂”意指能够对杂草是有毒的、控制杂草、杀死杂草、抑制杂草的生长、和\/或抑制杂草的繁殖的任何试剂或试剂组合。

如在此所使用,术语“接种物”意指当温度、湿度等条件利于微生物生长时能够在土壤上或土壤内繁殖的任何形式的微生物细胞或孢子。

在此使用的,术语“一种或多种杀昆虫剂”意指能够对昆虫是有毒的、控制昆虫、杀死昆虫、抑制昆虫的生长、和\/或抑制昆虫的繁殖的任何试剂或试剂组合。

如在此所使用的,术语“一种或多种异构体”意指在此提及的这些化合物和\/或分子(例如,类黄酮、LCO、CO、几丁质化合物、茉莉酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、亚麻酸或其衍生物、卡里金、氨基酸或其衍生物、糖或其衍生物、在此描述的萌发剂或其衍生物等)的所有立体异构体,包括对映异构体、非对映异构体以及所有构象异构体、旋转异构体和互变异构体,除非另外指明。在此披露的这些化合物和\/或分子包括处于基本上纯的左旋或右旋形式、或处于外消旋混合物或处于任何比例的对映异构体的所有对映异构体。在实施例披露(D)-对映异构体时,该实施例还包括(L)-对映异构体;在实施例披露(L)-对映异构体时,该实施例还包括(D)-对映异构体。在实施例披露(+)-对映异构体时,该实施例还包括(-)-对映异构体;在实施例披露(-)-对映异构体时,该实施例还包括(+)-对映异构体。在实施例披露(S)-对映异构体时,该实施例还包括(R)-对映异构体;在实施例披露(R)-对映异构体时,该实施例还包括(S)-对映异构体。实施例旨在包括处于非对映异构体纯的形式和处于所有比例的混合物形式的在此提及的这些化合物和\/或分子的任何非对映异构体。除非在化学结构或化学名称中清楚地指明立体化学,化学结构或化学名称旨在包括描绘的化合物和\/或分子的所有可能的立体异构体、构象异构体、旋转异构体以及互变异构体。

在此使用的,术语“一种或多种杀线虫剂”意指能够对线虫是有毒的、控制线虫、杀死线虫、抑制线虫的生长、和\/或抑制线虫的繁殖的任何试剂或试剂组合。

如在此所使用,术语“一种或多种固氮生物”意指能够将大气氮(N2<\/sub>)转化为氨(NH3<\/sub>)的任何生物。

如在此使用的,术语“一种或多种营养素”意指植物生长、植物健康、和\/或植物发育所需的任何营养素(例如,维生素、大量元素、微量营养素、痕量矿物质、有机酸、等)。

如在此所使用,术语“溶磷有机体”意指能够将不溶的磷酸盐转化为可溶的磷酸盐形式的任何有机体。

如在此所使用,术语“一种或多种植物”和“一种或多种植物部分”意指所有植物和植物群体,例如希望的和不希望的野生植物或作物植物(包括天然存在的作物植物)。作物植物可以是可通过常规的植物育种与优化方法或通过生物技术与基因工程方法或通过这些方法的组合获得的植物,包括转基因植物并且包括可受或可不受植物育种人权利保护的植物栽培品种。应该将植物部分理解为意指地面上下的所有植物部分和器官,如芽、叶、花以及根,可以提及的实例是叶、针叶、秆、茎、花、子实体、果实、种子、根、块茎以及根茎。植物部分还包括收获的材料以及营养繁殖和有性繁殖材料(例如,插条、块茎、根茎、侧枝以及种子等)。

在此使用的,可以与“一种或多种植物生长-增强剂”互换使用的术语“一种或多种信号分子”或“一种或多种植物信号分子”宽泛地指与未处理的植物或植物部分(例如,从未处理的种子收获的种子和植物)相比,导致增加的或增强的植物生长任何试剂。信号分子的非限制性实例包括LCO、CO、几丁质化合物、类黄酮、茉莉酮酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、亚麻酸或其衍生物、卡里金等。

在此使用的,术语“孢子”、“微生物孢子”等具有本领域的普通技术人员熟知和理解的其一般含义。在此使用的,术语“孢子”和“微生物孢子”意指处于其休眠、受保护状态的微生物。

组合物<\/u>

披露的组合物包括载体、如在此描述的一种或多种农业上有益的微生物、和一种或多种萌发剂。在某些实施例中,该组合物可以处于液体、凝胶、浆液、固体或粉末(可湿性粉剂或干粉)的形式。在具体的实施例中,该组合物是一种干燥的或基本干燥的组合物。在此使用的,术语“一种或多种基本干燥的组合物”应理解为是包含少于50wt.%的游离水的组合物,优选的是少于20wt.%的游离水,更优选的是少于10wt.%的游离水,甚至更优选的是少于5wt.%的游离水,甚至仍更优选的是少于2.5wt.%的游离水,最优选的是少于1wt.%的游离水。

如在此描述的干燥的组合物可以适用于与一种或多种液体混合,用于配制用于向植物或植物部分的叶面施用、种子处理、犁沟处理、或其组合的液体产物。在又另一个实施例中,该干燥的组合物包括在萌发剂的存在下保持孢子形式的微生物,直到用一种或多种溶剂配制该干燥的组合物(例如,混合和\/或组合该组合物)。溶剂可以是水性的或有机的。可以适用于某些实施例中的溶剂的代表性实例包括水或有机溶剂,例如异丙醇或二醇醚。

载体:<\/u>

在此所描述的载体将允许当配制时该一种或多种微生物保持为有效的(例如,能够增强植物生长、能够表达真菌活性等)和可行的。在此描述的载体的非限制性实例包括液体、浆液、或固体(包括可湿性粉末或干粉末)。在一个实施例中,该载体是如在此描述的土壤可兼容的载体。

在一个实施例中,该载体是液体载体。作为用于在此披露的组合物的载体有用的液体的非限制性实例包括水、水溶液、或非水溶液。在一个实施例中,该载体是水。在另一实施例中,该载体是水溶液,例如糖水。在另一实施例中,该载体是非水溶液。如果使用液体载体,则该液体(例如水)载体可以进一步包括生长培养基,用来培养在此描述的微生物。用于在此描述的微生物的适合的生长培养基的非限制性实例包括阿拉伯糖-葡糖酸盐(AG)、酵母浸出物甘露醇(YEM)、G16培养基、或本领域技术人员已知的与菌株兼容的、和\/或为其提供生长营养素的任何培养基。

在另一实施例中,该载体是浆液。在一个实施例中,该浆液可以包括粘合剂、液体、或其组合。预期粘合剂可以是能够将接种物(例如保藏的菌株中的一种或多种)粘合至感兴趣的基质(例如种子)上的任何试剂。粘合剂的非限制性实例包括藻酸盐、矿物油、糖浆、阿拉伯胶、蜂蜜、甲基纤维素、乳、墙纸浆糊、及其组合。适合用于浆液的液体的非限制性实例包括水或糖水。

在另一实施例中,该载体是固体。在具体实施例中,该固体是粉末。在一个实施例中,该粉末是可湿性粉末。在另一实施例中,该粉末是干粉末。在另一实施例中,该固体是颗粒。作为用于在此披露的组合物的载体有用的固体的非限制性实例包括泥炭、小麦、小麦壳、研磨的麦秸、粗麸、蛭石、纤维素、淀粉、土壤(巴氏消毒的或未巴氏消毒的)、石膏、滑石、粘土(例如,高岭土、膨润土、蒙脱石)、和硅胶。

微生物<\/u>:

在此披露的组合物包括一种或多种微生物。在一个实施例中,该一种或多种微生物是一种或多种细菌。在另一个实施例中,该一种或多种微生物是能够对植物和\/或植物部分具有一种或多种有益性质的一种或多种细菌(例如,能够促进植物生长,能够具有杀真菌活性等)。

在更具体的实施例中,该一种或多种细菌是孢子形成细菌菌株。用于生产稳定的微生物的并且尤其是细菌的方法在本领域中是已知的。参见<\/u>唐纳兰(Donnellan),J.E.,纳格斯(Nags),E.H.,和莱文森(Levinson),H.S.(1964),“用于枯草芽孢杆菌的孢子形成和萌发及生长的化学限定的、合成的培养基(Chemicallydefined,syntheticmediaforsporulationandforgerminationandgrowthofBacillussubtilis.)”细菌<\/u>学杂志<\/u>(JournalofBacteriology<\/u>)87(2):332-336;和陈(Chen),Z.,李(Li),Q.,刘(Liu),H.,于(Yu),N.,谢(Xie),T.,杨(Yang),M.,沈(Shen),P.,陈(Chen),X.(2010),“经统计实验设计通过培养基组分优化在深层培养中枯草芽孢杆菌孢子产量较大提高(GreaterenhancementofBacillussubtilissporeyieldsinsubmergedculturesbyoptimizationofmediumcompositionthroughstatisticalexperimentaldesigns.)”应用微生物学和生物技<\/u>术(Appl.Microbiol.<\/u>Biotechnol.<\/u>)85:1353-1360。

孢子形成细菌菌株的非限制性实例包括来自以下属的菌株:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、和\/或Vulcanobacillus。

在具体实施例中,该一种或多种孢子形成细菌是选自下属的细菌,这些属由以下各项组成:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、Vulcanobacillus、及其组合。

在另一实施例中,该一种或多种细菌菌株是一种芽孢杆菌属的菌株,例如,嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)、蜂房芽孢杆菌(Bacillusalvei)、噬胺芽胞杆菌(Bacillusaminovorans)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、解硫胺素芽胞杆菌(Bacillusaneurinolyticus)、海水芽孢杆菌(Bacillusaquaemaris)、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)、嗜硼芽孢杆菌(Bacillusboroniphilius)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、热容芽孢杆菌(Bacilluscaldolyticus)、中间芽胞杆菌(Bacilluscentrosporus)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、黄热芽孢杆菌(Bacillusflavothermus)、纺锤芽孢杆菌(Bacillusfusiformis)、球芽孢杆菌(Bacillusglobigii)、地狱芽孢杆菌(Bacillusinfernus)、幼虫芽孢杆菌(Bacilluslarvae)、侧孢芽孢杆菌(Bacilluslaterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、马铃薯杆菌(Bacillusmesentericus)、胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillusmycoides)、纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)、泛养芽胞杆菌(Bacilluspantothenticus)、多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)、伪炭疽芽孢杆菌(Bacilluspseudoanthracis)、短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)、施氏芽胞杆菌(Bacillusschlegelii)、球形芽孢杆菌(Bacillussphaericus)、耐热芽孢杆菌(Bacillussporothermodurans)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophillus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、嗜热葡糖苷酶芽胞杆菌(Bacillusthermoglucosidasius)、苏芸金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)、Bacillusvulgatis、韦氏芽孢杆菌(Bacillusweihenstephanensis)、及其组合。

在另一实施例中,该一种或多种细菌菌株是一种短芽孢杆菌属的菌株,例如,短短芽孢杆菌(Brevibacillusbrevis);美丽短芽孢杆菌(Brevibacillusformosus);侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporus);或类短短芽孢杆菌(Brevibacillusparabrevis)、及其组合。

在另一实施例中,该一种或多种细菌菌株是一种类芽孢杆菌属的菌株,例如,蜂房芽胞杆菌(Paenibacillusalvei);解淀粉类芽孢杆菌(Paenibacillusamylolyticus);固氮类芽孢杆菌(Paenibacillusazotofixans);Paenibacilluscookii;浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillusmacerans);多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa);或强壮类芽孢杆菌(Paenibacillusvalidus)、及其组合。

在更具体的实施例中,该一种或多种细菌菌株是选自下组的芽胞杆菌属的菌株,该组由以下各项组成:短小芽孢杆菌分离物AQ717,NRRLB-21662(来自Fa.AgraQuest公司,美国);短小芽孢杆菌分离物NRRLB-30087(来自Fa.AgraQuest公司,美国);芽孢杆菌属物种分离物AQ175,ATCC55608(来自Fa.AgraQuest公司,美国);孢杆菌属物种分离物AQ177,ATCC55609(来自Fa.AgraQuest公司,美国);枯草芽孢杆菌分离物AQ713,NRRLB-21661(在MAX和ASO下)(来自Fa.AgraQuest公司,美国);枯草芽孢杆菌分离物AQ743,NRRLB-21665(来自Fa.AgraQuest公司,美国);解淀粉芽孢杆菌FZB24(例如,作为来自美国诺维信生物制剂公司(NovozymesBiologicals,Inc.,USA)的分离物NRRLB-50304和NRRLB-50349保藏);解淀粉芽孢杆菌TJ1000(即,还称为1BE,分离物ATCCBAA-390);苏芸金芽胞杆菌分离物AQ52,NRRLB-21619(来自Fa.AgraQuest公司,美国);枯草芽孢杆菌解淀粉变种TrigoCor(还称为“TrigoCor1448”;例如,分离物巴西农业研究院(Embrapa)Trigo登录号144\/88.4Lev,康奈尔(Cornell)登录号Pma007BR-97、及ATCC登录号202152,来自康奈尔大学(CornellUniversity),美国)及其组合。

在具体实施例中,该一种或多种细菌菌株将以在1x102<\/sup>和1x1012<\/sup>CFU\/g组合物之间的量存在,具体的是以在1x104<\/sup>和1x1011<\/sup>CFU\/g组合物之间的量存在,并且更具体的是以在1x105<\/sup>和5x1010<\/sup>CFU\/g组合物之间的量存在。在更具体的实施例中,该一种或多种细菌菌株将以在1x108<\/sup>和1x1010<\/sup>CFU\/g组合物之间的量存在。

该一种或多种细菌菌株的发酵可以使用常规的发酵过程在实验室或工业发酵罐中进行,这些常规的发酵过程例如,需氧液体培养技术、摇瓶培养、以及小规模或大规模发酵(例如,连续、分批、分批补料、固态发酵等),并且此类过程是本领域中熟知的。尽管有用于生产该一种或多种细菌菌株的生产方法,可以直接使用来自培养基的一种或多种细菌菌株,或使其经受纯化和\/或进一步加工步骤(例如,干燥过程)。

在发酵之后,该一种或多种细菌菌株可以使用常规技术(例如,通过过滤、离心等)回收。可替代地,该一种或多种细菌菌株可以被干燥(例如,空气干燥、冷冻干燥、或喷雾干燥至低水分水平,并且存储在适合的温度例如室温下)。

萌发剂<\/u>:

在此描述的组合物包括一种或多种萌发剂。在此描述的一种或多种萌发剂可以处于液体或固体形式(包括可湿性粉末或干粉末)。在一个实施例中,该萌发剂是处于液体形式。在另一个实施例中,该萌发剂是处于固体形式。在具体的实施例中,该萌发剂是处于粉末形式的固体。在另一个实施例中,该粉末是可湿性粉末。在又另一实施例中,该粉末是干粉末。

可以适用于在此描述的组合物的萌发剂的非限制性实例包括乳酸盐;乳糖(如在乳制品中发现的)、碳酸氢盐或碳酸盐化合物例如碳酸氢钠;二氧化碳(例如,碳酸:溶解于水中的CO2<\/sub>,常见于“苏打”或“软饮料”中,例如可乐或一些果味饮料);吸附脂质的化合物(例如,淀粉,例如在小麦、稻或其他谷物和马铃薯以及一些其他蔬菜中发现的);可以吸附或吸收能够抑制孢子萌发的脂肪酸和脂质材料的高比表面积的活性炭或类似的材料;单糖例如果糖、葡萄糖、甘露糖、或半乳糖;丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甘氨酸、或其他氨基酸、及其衍生物例如N-(L-a-天冬氨酰)-L-苯丙氨酸(通常以商品名称“Aspartame”出售);肌苷;胆盐例如牛磺胆酸盐;及此类孢子萌发剂的组合。例如,有用的孢子萌发剂可以包括单独的丙氨酸或与乳酸盐组合的丙氨酸;L-天冬酰胺、葡萄糖、果糖、及钾离子的一种组合(AGFK);氨基酸例如天冬酰胺、半胱氨酸、或单独的丝氨酸或与乳酸盐组合的丝氨酸;和通过高压处理单糖产生的焦糖或与氨基酸组合的此类焦糖。在一个实施例中,该组合物包含一种或多种萌发剂。在具体的实施例中,该组合物包括L-天冬酰胺、葡萄糖、果糖、及钾离子的一种组合(AGFK)。

在具体实施例中,该一种或多种萌发剂将以0.001mM至10.0M组合物的浓度存在,具体的是以0.01mM至5.0M组合物的浓度存在,并且更具体的是以0.1mM至1.0M组合物的浓度存在。在更具体的实施例中,该一种或多种萌发剂将以在1.0mM至0.1M的组合物之间的浓度存在。

农业上有益的成分<\/u>:

在此披露的组合物可以包括一种或多种农业上有益的成分。可替代地,正如本领域技术人员将理解的,这些试剂中的任何一种或多种可以通过单独的组合物或配制品被用于在此描述的方法中。农业上有益的成分的非限制性实例包括一种或多种生物活性成分、营养素、生物刺激剂、防腐剂、聚合物、润湿剂、表面活性剂、除草剂、杀真菌剂、杀昆虫剂或其组合。

一种或多种生物活性成分:<\/u>

除了在此描述的这一种或多种类黄酮之外,在此描述的组合物可以任选地包括一种或多种如在此描述的生物活性成分。生物活性成分的非限制性实例包括植物信号分子(例如,脂壳寡糖(LCO)、壳寡糖(CO)、几丁质化合物、茉莉酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、亚麻酸或其衍生物、卡里金等)以及有益微生物(例如,根瘤菌属、慢生根瘤菌属、中华根瘤菌属、固氮根瘤菌属、球囊霉属、巨孢囊霉属、膜盘菌属(Hymenoscyphousspp.)、树粉孢属、蜡蘑属、豆马勃属、须腹菌属(Rhizopogonspp.)、硬皮马勃属、丝核菌属、不动杆菌属、节细菌属、节丛孢菌属、曲霉属、固氮螺菌属、芽孢杆菌属、伯克氏菌属、假丝酵母属、单胞菌属、肠杆菌属、正青霉属、微小杆菌属、克雷伯氏杆菌属、克吕沃氏菌属、微杆菌属、毛霉属、拟青霉属、类芽孢杆菌属、青霉属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、链孢子囊菌属、斯瓦米氏属(Swaminathania)、硫杆菌属、有孢圆酵母属(Torulosporaspp.)、弧菌属、黄杆菌属、黄单胞菌属等)。

一种或多种植物信号分子<\/u>:

在实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种植物信号分子。在一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种LCO。在另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种CO。在仍另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种几丁质化合物。在又另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种非类黄酮结瘤基因诱导物(例如,茉莉酸、亚油酸、亚麻酸及其衍生物)。在再又另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种卡里金或其衍生物。在再另一个实施例中,该一种或多种植物信号分子是一种或多种LCO、一种或多种CO、一种或多种几丁质化合物、一种或多种非类黄酮结瘤基因诱导物及其衍生物、一种或多种卡里金及其衍生物、或其任何信号分子组合。

LCO<\/u>:

脂-壳寡糖化合物(LCO)(还称为共生性结瘤信号或结瘤因子)由具有缩合在非-还原端的N-连接的脂酰基链的β-l,4-连接的N-乙酰基-D-葡糖胺(“GIcNAc”)残基的寡糖骨架组成。LCO的区别在于骨架中GIcNAc残基的数目、脂酰基链的长度和饱和度以及还原和非-还原糖残基的取代。参见,例如,德耐尔(Denarie),等人,生物化学年鉴(Ann.Rev.Biochem.)65:503-35(1996),哈梅尔(Hamel),等人,植物学(Planta)232:787-806(2010);普洛姆(Prome),等人,纯粹与应用化学(Pure&Appl.Chem.)70(1):55-60(1998)。LCO的一个实例在下文以化学式I呈现:

其中:

G是可以被例如氮上的乙酰基基团、硫酸基团、乙酰基基团和\/或氧上的醚基团取代的己糖胺,

可以相同或不同的R1<\/sub>、R2<\/sub>、R3<\/sub>、R5<\/sub>、R6<\/sub>以及R7<\/sub>表示H、CH3<\/sub>CO--、Cx<\/sub>Hy<\/sub>CO--,其中x是一个在0与17之间的整数并且y是一个在1与35之间的整数,或任何其他酰基基团(例如像氨甲酰基),

R4<\/sub>可以表示一种包含至少12个碳原子的完全饱和的脂肪链或可以表示包含至少12个碳原子的单-、二-、或三不饱和的脂肪链,并且n是一个在1与4之间的整数。

LCO可以从细菌中获得(分离和\/或纯化自细菌),例如根瘤菌,例如根瘤菌属物种、慢生根瘤菌属物种、中华根瘤菌属物种和固氮根瘤菌属物种。每个这样的细菌种类的LCO结构都是具有特征的,并且每种菌株都可以产生多种具有不同结构的LCO。例如,来自苜蓿中华根瘤菌(S.meliloti)的特定LCO还已经在美国专利5,549,718中描述为具有化学式II:

其中R表示H或CH3<\/sub>CO--并且n等于2或3。

甚至更特定的LCO包括NodRM、NodRM-1、NodRM-3。当被乙酰化时(R=CH3<\/sub>CO--),它们分别变为AcNodRM-1和AcNodRM-3(美国专利5,545,718)。

来自慢生型大豆根瘤菌的LCO描述于美国专利5,175,149和5,321,011中。宽泛地,它们是包括甲基呋喃的戊糖植物激素。描述了许多这些慢生型大豆根瘤菌-衍生的LCO:BjNod-V(C18:1<\/sub>);BjNod-V(AC<\/sub>,C18:1<\/sub>),BjNod-V(C16:1<\/sub>);以及BjNod-V(AC<\/sub>,C16:0<\/sub>),其中“V”表示存在五个N-乙酰葡糖胺;“Ac”表示乙酰化;“C”后的数字表示脂肪酸侧链中的碳数;并且“:”后的数字表示双键数。

用于本发明的实施例中的LCO可以获得(即,分离和\/或纯化)自产生LCO的细菌菌株,例如固氮根瘤菌属、慢生根瘤菌属(包括慢生型大豆根瘤菌)、中慢生根瘤菌属、根瘤菌属(包括豌豆根瘤菌)、中华根瘤菌属(包括苜蓿中华根瘤菌)的菌株,以及被基因工程而产生LCO的细菌菌株。在一些实施例中,存在从这些根瘤菌和慢生根瘤菌微生物中获得的两种或更多种LCO的组合。

LCO是豆科植物共生中宿主特异性的首要决定因素(迪亚兹(Diaz),等人,分子植物-微生物相互作用(Mol.Plant-MicrobeInteractions)13:268-276(2000))。因此,在豆科内,根瘤菌的特定属和种与特定的豆科植物宿主建立了共生固-氮的的关系。这些植物-宿主\/细菌组合描述于亨利亚(Hungria),等人,土壤生物学与生物化学(SoilBiol.Biochem.)29:819-830(1997)。这些细菌\/豆科植物共生关系包括苜蓿中华根瘤菌\/紫花苜蓿和草木犀;豌豆根瘤菌蚕豆变种(R.leguminosarumbiovarviciae)\/豌豆和小扁豆;豌豆根瘤菌菜豆变种\/豆;慢生型大豆根瘤菌\/大豆;及豌豆根瘤菌三叶变种\/红三叶草。亨利亚(Hungria)还列出了根瘤菌物种的有效的类黄酮结瘤基因诱导物,以及由不同根瘤菌物种产生的具体LCO结构。然而,LCO特异性仅是豆类中结瘤的建立所需的。相比于从未处理的种子收获的植物,给出的LCO的用途不限于处理与其共生的豆科植物伴侣的种子,以便于获得按照蒲式耳数\/英亩所测量的增加的植物产量、增加的根数量、增加的根长度、增加的根质量、增加的根体积和增加的叶面积。

因此,通过进一步举例的方式,可以用于一些实施例中的LCO连同其天然和非天然发生的衍生物由以下化学式表示:

其中R1<\/sub>表示C14:0、3OH-C14:0、异-C15:0、C16:0、3-OH-C16:0、异-C15:0、C16:1、C16:2、C16:3、异-C17:0、异-C17:1、C18:0、3OH-C18:0、C18:0\/3-OH、C18:1、OH-C18:1、C18:2、C18:3、C18:4、C19:1氨甲酰基、C20:0、C20:1、3-OH-C20:1、C20:1\/3-OH、C20:2、C20:3、C22:1、和C18-26(ω-1)-OH(根据德哈斯(D’Haeze),等人,糖生物学(Glycobiology)12:79R-105R(2002),包括C18、C20、C22、C24和C26羟基化种类和C16:1Δ9、C16:2(Δ2,9)和C16:3(Δ2,4,9));R2<\/sub>表示氢或甲基;R3<\/sub>表示氢、乙酰基或氨甲酰基;R4<\/sub>表示氢、乙酰基或氨甲酰基;R5<\/sub>表示氢、乙酰基或氨甲酰基;R6<\/sub>表示氢、阿拉伯糖基、岩藻糖基、乙酰基、SO3<\/sub>H、硫酸酯、3-0-S-2-0-MeFuc、2-0-MeFuc、和4-0-AcFuc;R7<\/sub>表示氢、甘露糖基或丙三醇;R8<\/sub>表示氢、甲基、或-CH2<\/sub>OH;R9<\/sub>表示氢、阿拉伯糖基、或岩藻糖基;R10<\/sub>表示氢、乙酰基或岩藻糖基;并且n表示0、1、2或3。由该结构涵盖的天然发生的根瘤菌LCO的结构描述于德哈斯(D’Haeze),等人,同上中。

在一些实施例中还包括了获得(即,分离和\/或纯化)自菌根真菌(如球囊菌门(Glomerocycota)群组的真菌,例如根内球囊霉(Glomusintraradicus))的LCO的用途。获得自这些真菌的代表性LCO的结构描述于WO2010\/049751和WO2010\/049751中(其中描述的LCO也称为“Myc因子”)。代表性的菌根真菌衍生的LCO和其非天然发生的衍生物由以下结构表示:

其中n=1或2;R1<\/sub>表示C16、C16:0、C16:1、C16:2、C18:0、C18:1Δ9Z或C18:1Δ11Z;并且R2<\/sub>表示氢或SO3<\/sub>H。在一些实施例中,LCO是由菌根真菌产生的。在一些实施例中,这些LCO被用于在此描述的方法中。

在一些在此描述的实施例中进一步包括了合成的LCO化合物(例如WO2005\/063784中描述的那些)、经化学合成的LCO化合物(例如WO2007\/117500中描述的那些),以及通过基因工程产生的重组体LCO的用途。该基本的天然存在的LCO结构可以包含发现于天然存在的LCO中的修饰或取代,例如描述于斯帕英克(Spaink),植物科学评论(Crit.Rev.PlantSci.)54:257-288(2000)和德哈斯(D’Haeze),同上中的那些。用于构建LCO的前体寡糖分子(在下文描述的CO也可用作植物信号分子)还可以由基因工程化的生物来合成,例如像在萨曼(Samain)等人,碳水化合物研究(Carb.Res.)302:35-42(1997);科塔兹(Cottaz),等人,工程方法(Meth.Eng.)7(4):311-7(2005)和萨曼等人,生物技术杂志(J.Biotechnol.)72:33-47(1999)中所描述的(例如,其中图1示出了可以在携带基因nodBCHL的不同组合的大肠杆菌中重组生成的CO结构)。

LCO可以按不同纯度形式加以利用并且可以单独使用或以产LCO的细菌或真菌的培养物的形式使用-。例如,(可从诺维信公司(NovozymesBioAgInc.)商购)包含产生LCO的慢生型大豆根瘤菌的培养物(LCO-V(C18:1,MeFuc),MOR116)。用于提供基本上纯的LCO的方法包括从LCO和微生物的混合物中简单地除去微生物细胞,或通过LCO溶剂相分离、随后通过HPLC色谱法继续分离和纯化LCO分子,如例如美国专利5,549,718中所述。可以通过重复的HPLC来增强纯化,并且纯化的LCO分子可以冷冻干燥,以便长期存储。壳寡糖(CO)可以用作合成LCO生产的起始材料。出于一些实施例的目的,适合于使用的重组LCO至少是60%纯的,例如至少60%纯、至少65%纯、至少70%纯、至少75%纯、至少80%纯、至少85%纯、至少90%纯、至少91%纯、至少92%纯、至少93%纯、至少94%纯、至少95%纯、至少96%纯、至少97%纯、至少98%纯、至少99%纯、高达100%纯。

CO<\/u>:

壳寡糖(CO)作为鉴定为几丁质寡聚体的β-1-4连接的N-乙酰葡糖胺结构而已知,还称为N-乙酰壳寡糖。CO具有独特且不同的侧链修饰,这些修饰使得它们不同于几丁质分子((C8<\/sub>H13<\/sub>NO5<\/sub>)n,CAS编号1398-61-4)和壳聚糖分子[(C5<\/sub>H11<\/sub>NO4<\/sub>)n,CAS编号9012-76-4]。描述了CO的结构与产生的代表性文献如下:范德霍尔斯特(VanderHolst)等人,结构生物学当前观点(CurrentOpinioninStructuralBiology),11:608-616(2001);罗宾娜(Robina)等人,四面体(Tetrahedron)58:521-530(2002);哈奈尔(Hanel)等人,植物学(Planta)232:787-806(2010);罗赫(Rouge)等人第27章,实验医学与生物学进展(AdvancesinExperimentalMedicineandBiology)中的“复合碳水化合物的分子免疫学(TheMolecularImmunologyofComplexCarbohydrates)”,施普林格科学出版社(SpringerScience);温(Wan)等人,植物细胞(PlantCell)21:1053-69(2009);PCT\/F100\/00803(9\/21\/2000);以及德蒙特科雷特(Demont-Caulet)等人,植物生理学(PlantPhysiol.)120(1):83-92(1999)。这些CO可以是合成的或重组的。用于制备重组CO的方法在本领域是已知的。参见<\/u>例如,萨曼(Samain)等人(见上文<\/u>);科塔兹(Cottaz)等人,工程方法(Meth.Eng.)7(4):311-7(2005)以及萨曼等人,生物技术杂志(J.Biotechnol.)72:33-47(1999)。CO旨在包括其异构体、盐和溶剂化物。

几丁质化合物<\/u>:

作为真菌的细胞壁和昆虫与甲壳动物的外骨骼的主要组分的几丁质和壳聚糖也由GIcNAc残基构成。几丁质化合物包括几丁质(IUPAC:N-[5-[[3-乙酰氨基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2基]甲氧基甲基]-2-[[5-乙酰氨基-4,6-二羟基-2-(羟基甲基)噁烷-3-基]甲氧基甲基]-4-羟基-6-(羟基甲基)噁烷-3-基]乙酰胺)、壳聚糖(IUPAC:5-氨基-6-[5-氨基-6-[5-氨基-4,6-二羟基-2(羟基甲基)噁烷-3-基]氧基-4-羟基-2-(羟基甲基)噁烷-3-基]氧基-2(羟基甲基)噁烷-3,4-二醇)及其异构体、盐和溶剂化物。

某些几丁质和壳聚糖化合物可以商业地获得自例如西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)或制备自昆虫、甲壳动物壳或真菌细胞壁。用于制备几丁质和壳聚糖的方法在本领域是已知的,并且已经描述于,例如,美国专利4,536,207(制备自甲壳动物壳);伯查纳瓦里奇(Pochanavanich)等人,应用微生物学快报(Lett.Appl.Microbiol.)35:17-21(2002)(制备自真菌细胞壁);以及美国专利5,965,545(制备自蟹壳和商业壳聚糖的水解)中。可以获得范围从小于35%至大于90%脱乙酰化的脱乙酰化几丁质和壳聚糖,并且包括广谱的分子量,例如小于15kD的低分子量壳聚糖寡聚体和0.5至2kD的几丁质寡聚体;分子量约15kD的“实用等级”壳聚糖;以及高达70kD的高分子量壳聚糖。用于种子处理的配制的某些几丁质和壳聚糖组合物也是可商购的。商品包括例如(植物防御支持公司(PlantDefenseBoosters,Inc.))和BEYONDTM<\/sup>(Agrihouse公司)。

类黄酮(结瘤基因诱导物)<\/u>:

类黄酮化合物可商购自,例如,诺维信公司(NovozymesBioAg),萨斯卡通(Saskatoon),加拿大;纳特兰德国际公司(NatlandInternationalCorp.),三角科学园(ResearchTrianglePark),北卡罗来纳州;MP生物医药公司(MPBiomedicals),欧文,加州;LC实验室(LCLaboratories),沃本,马萨诸塞州。类黄酮化合物可以分离自植物或种子,例如像美国专利5,702,752;5,990,291;以及6,146,668中所述。类黄酮化合物还可以由基因工程化的生物(例如酵母)产生,如,描述于罗尔斯顿(Ralston)等人,植物生理学(PlantPhysiology)137:1375-88(2005)中。类黄酮化合物旨在包括所有类黄酮化合物及其异构体、盐和溶剂化物。

该一种或多种类黄酮可以是天然的类黄酮(即,不是合成产生的)、合成的类黄酮(例如,化学合成的类黄酮)或其组合。在具体实施例中,在此描述的组合物可以包括黄烷醇、黄酮、花色素、异类黄酮、新类黄酮及其组合,包括其所有异构体、溶剂化物、水合物、多晶型、晶型、非晶型以及盐变型。

在一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种黄烷醇。在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的黄烷醇,该组由以下各项组成:黄烷-3-醇(例如,儿茶素(C)、没食子儿茶素(GC)、儿茶素3-没食子酸酯(Cg)、没食子儿茶素3-没食子酸酯(GCg)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)表儿茶素3-没食子酸酯(ECg)、表没食子儿茶素3-没食子酸酯(EGCg),等)、黄烷-4-醇、黄烷-3,4-二醇(例如,无色花色素),原花色素(例如,包括黄烷醇的二聚体、三聚体、低聚物、或多聚物)、及其组合。在再又另一个实施例中,这些组合物可以包括一种或多种选自下组的黄烷醇,该组由以下各项组成:儿茶素(C)、没食子儿茶素(GC)、儿茶素3-没食子酸酯(Cg)、没食子儿茶素3-没食子酸酯(GCg)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)表儿茶素3-没食子酸酯(ECg)、黄烷-4-醇、无色花色素、以及其二聚体、三聚体、寡聚体或多聚体。

在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种黄酮。在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的黄酮,该组由以下各项组成:黄酮(例如,木犀草素、芹菜素、柑桔黄酮、等)、黄酮醇(例如、槲皮素、栎素、芸香苷、堪非醇、山柰苷、紫云英苷、槐属黄酮苷、杨梅树皮素、漆黄素、异鼠李素、霍香黄酮醇、甲基鼠李素、等)、黄烷酮(例如橙皮素、橙皮苷、柚皮素、圣草酚、高圣草酚、等)、以及二氢黄酮醇(例如,二氢槲皮素、二氢堪非醇、等)。在再又另一个实施例中,这些组合物可以包括一种或多种选自下组的黄酮,该组由以下各项组成:木犀草素、芹菜素、柑桔黄酮、槲皮素、栎素、芸香苷、山柰酚、山柰苷、黄芪甙、槐属黄酮甙、杨梅树皮素、漆黄素、异鼠李素、霍香黄酮醇、鼠李秦素、橙皮素、橙皮苷、柚皮素、圣草素、高圣草素、二氢槲皮素、二氢山柰酚、及其组合。

在仍另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种花色素。在又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的花色素,该组由以下各项组成:矢车菊素、飞燕草素、锦葵色素、天竺葵色素、芍药素、矮牵牛素、及其组合。

在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种异黄酮类化合物。在再又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的异类黄酮,该组由以下各项组成:植物雌激素、异黄酮(例如,染料木素、大豆黄酮、黄豆黄素等)、和异黄烷(例如雌马酚、醉鱼豆烷(lonchocarpane)、疏花烷(laxiflorane)等)、及其组合。在又另一个实施例中,这些组合物可以包括一个或多个选自下组的异类黄酮,该组由以下各项组成:染料木素、大豆黄酮、黄豆黄素、雌马酚、醉鱼豆烷(lonchocarpane)、疏花烷(laxiflorane)、及其组合。

在另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种新类黄酮。在又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的新类黄酮,该组由以下各项组成:新黄酮(例如,海棠果素)、新黄酮烯(neoflavene)(例如,黄檀色烯)、coutareagenin、黄檀素、nivetin、及其组合。在再又另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种选自下组的新类黄酮,该组由以下各项组成:海棠果素、黄檀色烯、coutareagenin、黄檀素、nivetin、及其组合。

一种或多种非类黄酮结瘤基因诱导物<\/u>:

茉莉酸(JA,[1R-[1α,2β(Z)]]-3-氧代-2-(戊烯基)环戊烷乙酸)及其衍生物、亚油酸((Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸)及其衍生物和亚麻酸((Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸)及其衍生物也可以用于在此描述的组合物中。非类黄酮结瘤基因诱导物旨在不仅包括在此描述的非类黄酮结瘤基因诱导物,还包括其异构体、盐和溶剂化物。

统称为茉莉酸酯的茉莉酸及其甲酯(茉莉酸甲酯(MeJA))是天然存在于植物中的类十八烷基化合物-。茉莉酸由小麦幼苗的根产生,并且由真菌微生物(如可可球二孢和藤仓赤霉菌(Gibbrellafujikuroi)、酵母(酿酒酵母)以及大肠杆菌的致病和非致病菌株产生-。亚油酸和亚麻酸是在茉莉酸的生物合成过程中产生。据报道,茉莉酸酯、亚油酸和亚油酸(及其衍生物)是根际细菌表达结瘤基因或产生LCO的诱导物。参见<\/u>例如,马布德(Mabood),法兹利(Fazli),茉莉酸酯诱导结瘤基因在慢生型大豆根瘤菌中的表达(JasmonatesinducetheexpressionofnodgenesinBradyrhizobiumjaponicum),2001年5月17日;和马布德(Mabood),法兹利(Fazli),“亚油酸和亚麻酸诱导结瘤基因在慢生型大豆根瘤菌中的表达(LinoleicandlinolenicacidinducetheexpressionofnodgenesinBradyrhizobiumjaponicum)”,USDA3,2001年5月17日。

可以用于在此描述的组合物中的亚油酸、亚麻酸和茉莉酸的有用衍生物包括酯、酰胺、糖苷以及盐。代表性酯是以下化合物,其中亚油酸、亚麻酸或茉莉酸的羧基已经被--COR基团替代,其中R是--OR1<\/sup>基团,其中R1<\/sup>是:烷基基团,如C1<\/sub>-C8<\/sub>直链或支链烷基基团,例如甲基、乙基或丙基基团;烯基,如C2<\/sub>-C8<\/sub>直链或支链烯基基团;炔基,如C2<\/sub>-C8<\/sub>直链或支链炔基基团;具有例如6至10个碳原子的芳基基团;或具有例如4至9个碳原子的杂芳基基团,其中杂芳基基团中的杂原子可以是例如N、O、P或S。代表性酰胺是以下化合物,其中亚油酸、亚麻酸或茉莉酸的羧基已经被--COR基团替代,其中R是NR2<\/sup>R3<\/sup>基团,其中R2<\/sup>和R3<\/sup>独立地是:氢;烷基基团,如C1<\/sub>-C8<\/sub>直链或支链烷基基团,例如甲基、乙基或丙基基团;烯基,如C2<\/sub>-C8<\/sub>直链或支链烯基基团;炔基,如C2<\/sub>-C8<\/sub>直链或支链炔基基团;具有例如6至10个碳原子的芳基基团;或具有例如4至9个碳原子的杂芳基基团,其中杂芳基基团中的杂原子可以是例如N、O、P或S。可以通过已知的方法制备酯,例如酸-催化的亲核加成,其中将羧酸在催化量的矿物酸的存在下与醇反应。也可以通过已知的方法制备酰胺,例如通过使羧酸在偶联剂(例如二环己基碳二亚胺(DCC))的存在下与适当的胺在中性条件下反应。亚油酸、亚麻酸和茉莉酸的适合的盐包括例如碱加成盐。可以用作制备这些化合物的代谢上可接受的碱盐的试剂的碱包括来源于阳离子(如碱金属阳离子(例如,钾和钠)和碱土金属阳离子(例如,钙和镁))的那些。这些盐可以通过将亚油酸、亚麻酸或茉莉酸的溶液与碱溶液混合在一起而容易地制备。盐可以通过过滤从溶液中沉淀并收集,或可以通过其他手段(例如通过蒸发溶剂)回收。

一种或多种卡里金<\/u>:

卡里金是插烯4H-吡喃酮,例如2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮,包括其衍生物和类似物。卡里金旨在包括其异构体、盐和溶剂化物。这些化合物的实例由以下结构表示:

其中;Z是O、S或NR5<\/sub>;R1<\/sub>、R2<\/sub>、R3<\/sub>、以及R4<\/sub>各自独立地是H、烷基、烯基、炔基、苯基、苄基、羟基、羟烷基、烷氧基、苯氧基、苄氧基、CN、COR6<\/sub>、COOR=、卤素、NR6<\/sub>R7<\/sub>、或NO2<\/sub>;并且R5<\/sub>、R6<\/sub>、和R7<\/sub>各自独立地是H、烷基或烯基,或其生物学上可接受的盐。这些化合物的生物学上可接受的盐的实例可以包括与生物学上可接受的酸形成的酸加成盐,其实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或磷酸氢盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐;甲磺酸盐、苯磺酸盐以及对-甲苯磺酸。另外的生物学上可接受的金属盐可以包括与碱形成的碱金属盐,其实例包括钠盐和钾盐。由该结构涵盖且可以适于在此处描述的一些实施例中使用的化合物的实例包括以下各项:3-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>、R3<\/sub>、R4<\/sub>=H)、2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R2<\/sub>、R3<\/sub>、R4=H)、7-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R2<\/sub>、R4<\/sub>=H,R3<\/sub>=CH3<\/sub>)、5-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R2<\/sub>、R3<\/sub>=H,R4<\/sub>=CH3<\/sub>)、3,7-二甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R3<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>、R4<\/sub>=H)、3,5-二甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R4<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>、R3<\/sub>=H)、3,5,7-三甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R3<\/sub>、R4<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>=H)、5-甲氧基甲基-3-甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>、R3<\/sub>=H,R4<\/sub>=CH2<\/sub>OCH3<\/sub>)、4-溴-3,7-二甲基-2H-呋喃并[2,3-c]吡喃-2-酮(其中R1<\/sub>、R3<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>=Br,R4<\/sub>=H)、3-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2(3H)-酮(其中Z=NH,R1<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>、R3<\/sub>、R4<\/sub>=H)、3,6-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2(6H)-酮(其中Z=N--CH3<\/sub>,R1<\/sub>=CH3<\/sub>,R2<\/sub>、R3<\/sub>、R4<\/sub>=H)。参见<\/u>美国专利7,576,213。这些分子又称卡里金。参见<\/u>,哈尔福德(Halford),化学与工程新闻(Chem.Eng.News)(2010年4月12日),第37-38页中的“烟雾信号(SmokeSignals)”(报道到森林火灾后,包含在烟雾中的卡里金或丁烯羟酸内酯充当生长刺激剂并刺激种子萌发,并且可以使已经被存储的种子(例如玉米、番茄、莴苣以及洋葱)健壮)。这些分子是美国专利7,576,213的主题。

一种或多种有益微生物<\/u>:

在一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种额外的有益微生物(除了以上描述的那些以外)。该一种或多种有益微生物可以处于孢子形式、营养体形式或其组合。

A)固氮生物<\/u>:

在具体实施例中,该一种或多种有益微生物是固氮生物(即,为共生固氮细菌的细菌)。

在实施例中,该固氮生物是如下属的细菌:固氮根瘤菌属、固氮螺菌属、慢生根瘤菌属、中慢生根瘤菌属、根瘤菌属、中华根瘤菌属、及其组合。

可以在此处描述的组合物中用作细菌固氮生物的具体物种的非限制性实例包括茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobiumcaulinodans)、德贝莱纳固氮根瘤菌(Azorhizobiumdoebereinerae)、亚马逊固氮螺菌(Azospirillumamazonense)、巴西固氮螺菌(Azospirillumbrasilense)、巴西固氮螺菌(Azospirillumbrasilense)分离物INTAAz-39(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、加拿大固氮螺菌(Azospirillumcanadense)、德贝莱纳固氮螺菌(Azospirillumdoebereinerae)、台湾固氮螺菌(Azospirillumformosense)、高盐固氮螺菌(Azospirillumhalopraeferans)、伊拉克固氮螺菌(Azospirillumirakense)、大型移动式固氮螺菌(Azospirillumlargimobile)、生脂固氮螺菌(Azospirillumlipoferum)、糖蜜草固氮螺菌(Azospirillummelinis)、水稻固氮螺菌(Azospirillumoryzae)、煤焦固氮螺菌(Azospirillumpicis)、皱纹固氮螺菌(Azospirillumrugosum)、嗜硫固氮螺菌(Azospirillumthiophilum)、玉米固氮螺菌(Azospirillumzeae)、贝特慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumbête)、加那利慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumcanariense)、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumelkanii)、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumelkanii)分离物SEMIA587(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、埃氏慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumelkanii)分离物SEMIA5019(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、西表岛慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumiriomotense)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物SEMIA5079(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物SEMIA5080(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50608(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50609(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50610(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50611(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50612(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50592(还被保藏为NRRLB-59571)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50593(还被保藏为NRRLB-59572)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50586(还被保藏为NRRLB-59565)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50588(还被保藏为NRRLB-59567)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50587(还被保藏为NRRLB-59566)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50589(还被保藏为NRRLB-59568)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50591(还被保藏为NRRLB-59570)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)NRRLB-50590(还被保藏为NRRLB-59569)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50594(还被保藏为NRRLB-50493)(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50726(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50727(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50728(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50729(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物NRRLB-50730(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物USDA532C、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物USDA110、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物USDA123、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物USDA127、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)分离物USDA129、豆薯慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumjicamae)、辽宁慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumliaoningense)、大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumpachyrhizi)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumyuanmingense)、合欢中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumalbiziae)、紫穗槐中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumamorphae)、查科中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumchacoense)、鹰嘴豆中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumciceri)、中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobiumhuakuii)、中慢生型百脉根根瘤菌(Mesorhizobiumloti)、地中海中慢生根瘤菌(Mesorhizobiummediterraneum)、普卢伊中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumpluifarium)、北方中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumseptentrionale)、温带中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumtemperatum)、天山中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumtianshanense)、解纤维素根瘤菌(Rhizobiumcellulosilyticum)、大田市根瘤菌(Rhizobiumdaejeonense)、艾利特根瘤菌(Rhizobiumetli)、山羊豆根瘤菌(Rhizobiumgalegae)、高卢根瘤菌(Rhizobiumgallicum)、(Rhizobiumgiardinii)、海南根瘤菌(Rhizobiumhainanense)、胡特兰根瘤菌(Rhizobiumhuautlense)、木兰根瘤菌(Rhizobiumindigoferae)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)分离物SO12A-2-(IDAC080305-01)、黄土根瘤菌(Rhizobiumloessense)、羽扇豆根瘤菌(Rhizobiumlupini)、葡萄牙根瘤菌(Rhizobiumlusitanum)、苜蓿根瘤菌(Rhizobiummeliloti)、内蒙根瘤菌(Rhizobiummongolense)、汨罗江根瘤菌(Rhizobiummiluonense)、苏拉根瘤菌(Rhizobiumsullae)、热带根瘤菌(Rhizobiumtropici)、安迪克拉根瘤菌(Rhizobiumundicola)、杨陵根瘤菌(Rhizobiumyanglingense)、阿布里中华根瘤菌(Sinorhizobiumabri)、附着剑中华根瘤菌(Sinorhizobiumadhaerens)、美洲中华根瘤菌(Sinorhizobiumamericanum)、木本树中华根瘤菌(Sinorhizobiumaboris)、费氏中华根瘤菌(Sinorhizobiumfredii)、印度中华根瘤菌(Sinorhizobiumindiaense)、柯斯第中华根瘤菌(Sinorhizobiumkostiense)、鸡眼草中华根瘤菌(Sinorhizobiumkummerowiae)、苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummedicae)、草木樨中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)、墨西哥中华根瘤菌(Sinorhizobiummexicanus)、莫雷兰中华根瘤菌(Sinorhizobiummorelense)、撒哈拉中华根瘤菌(Sinorhizobiumsaheli)、好客中华根瘤菌(Sinorhizobiumterangae)、新疆中华根瘤菌(Sinorhizobiumxinjiangense)、及其组合。

B)解磷微生物<\/u>:

在具体实施例中,该一种或多种有益微生物是解磷微生物。

在实施例中,该解磷微生物是青霉属、踝节菌属、及其组合的真菌。

可以在此处描述的组合物中用作解磷真菌的具体物种的非限制性实例包括发白青霉(Penicilliumalbidum)、黄灰青霉(Penicilliumaurantiogriseum)、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)(以前称为拜莱青霉(Penicilliumbilaii)和拜拉吉青霉菌(Penicilliumbilaji))、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物ATCC20851、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物ATCC22348、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物V08\/021001(还被保藏为NRRLB-50612)、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50776、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50777、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50778、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50779、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50780、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50781、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50782、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50783、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50784、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50785、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50786、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50787、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50788、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物NRRLB-50169、拜赖青霉(Penicilliumbilaiae)分离物ATCC18309、短密青霉(Penicilliumbrevicompactum)、短密青霉(Penicilliumbrevicompactum)分离物AgRF18、变灰青霉(Penicilliumcanescens)、变灰青霉(Penicilliumcanescens)分离物ATCC10419、产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)、黄暗青霉(Penicilliumcitreonigrum)、桔青霉(Penicilliumcitrinum)、指状青霉(Penicilliumdigitatum)、扩展青霉(Penicilliumexpansum)、扩展青霉(Penicilliumexpansum)分离物ATCC24692、扩展青霉(Penicilliumexpansum)分离物YT02、瘿青霉(Penicilliumfellutanum)、瘿青霉(Penicilliumfellutanum)分离物ATCC48694、常见青霉(Penicilliumfrequentas)、锈色青霉(Penicilliumfuscum)、菲西氏青霉(Penicilliumfussiporus)、加斯特氏青霉(Penicilliumgaestrivorus)、加斯特氏青霉(Penicilliumgaestrivorus)分离物NRRL50170、光滑青霉(Penicilliumglabrum)、光滑青霉(Penicilliumglabrum)分离物DAOM239074、光滑青霉(Penicilliumglabrum)分离物CBS229.28、灰绿青霉(Penicilliumglaucum)、灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvum)、纠缠青霉(Penicilliumimplicatum)、微紫青霉(Penicilliumjanthinellum)、微紫青霉(Penicilliumjanthinellum)分离物ATCC10455、Penicilliumlanosocoeruleum、Penicilliumlanosocoeruleum分离物ATCC48919、淡紫青霉(Penicilliumlilacinum)、朱黄青霉(Penicilliumminioluteum)、山地青霉(Penicilliummontanense)、黑青霉(Penicilliumnigricans)、草酸青霉(Penicilliumoxalicum)、松木青霉(Penicilliumpinetorum)、嗜松青霉(Penicilliumpinophilum)、产紫青霉(Penicilliumpurpurogenum)、生根青霉(Penicilliumradicum)、生根青霉(Penicilliumradicum)分离物N93\/47267、生根青霉(Penicilliumradicum)分离物FRR4717、生根青霉(Penicilliumradicum)分离物ATCC201836、生根青霉(Penicilliumradicum)分离物FRR4719、雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)、雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)分离ATCC10490、皱褶青霉(Penicilliumrugulosum)、简青霉(Penicilliumsimplicissimum)、离生青霉(Penicilliumsolitum)、变幻青霉(Penicilliumvariabile)、毡毛青霉(Penicilliumvelutinum)、纯绿青霉(Penicilliumviridicatum)、棘孢踝节菌(Talaromycesaculeatus)、棘孢踝节菌(Talaromycesaculeatus)分离物ATCC10409、及其组合。

C)菌根菌<\/u>:

在具体实施例中,该一种或多种有益微生物是菌根菌。适合的菌根菌包括内生菌根菌(还称为泡囊-丛枝状菌根菌、VAM、丛枝菌根菌、或AM)、外生菌根菌、石南型菌根菌、及其组合。

在实施例中,该菌根菌是如下属中的一种真菌:巨孢囊霉属、球囊霉属、膜盘菌属(Hymenoscyphous)、蜡蘑属、树粉孢属、类球囊霉属、豆马勃属、丝核菌属、须腹菌属、硬皮马勃属、及其组合。

可以用于在此描述的组合物中的具体菌根菌物种的非限制性实例包括珠状巨孢囊霉(Gigasporamargarita)、聚丛球囊霉(Glomusaggregatum)、巴西球囊霉(Glomusbrasilianum)、明球囊霉(Glomusclarum)、沙漠球囊霉(Glomusdeserticola)、幼套球囊霉(Glomusetunicatum)、聚生球囊霉(Glomusfasciculatum)、根内球囊霉(Glomusintraradices)、单孢球囊霉(Glomusmonosporum)、摩西球囊霉(Glomusmosseae)、灰斑膜盘菌(Hymenoscyphousericae)、双色蜡蘑(Laccariabicolor)、漆蜡蘑(Laccarialaccata)、树粉孢属、Paraglomusbrazilianum、彩色豆马勃(Pisolithustinctorius)、丝核菌属物种(Rhizoctoniasp.)、阿米尔氏须腹菌(Rhizopogonamylopogon)、富尔维氏须腹菌(Rhizopogonfulvigleba)、浅黄根须腹菌(Rhizopogonluteolus)、长毛须腹菌(Rhizopogonvillosuli)、光硬皮马勃(Sclerodermacepa)、黄硬皮马勃(Sclerodermacitrinum)、(珠状巨孢囊霉(Gigasporamargarita)、聚丛球囊霉(Glomusaggregatum)、明球囊霉(Glomusclarum)、沙漠球囊霉(Glomusdeserticola)、幼套球囊霉(Glomusetunicatum)、根内球囊霉(Glomusintraradices)、单孢球囊霉(Glomusmonosporum)、摩西球囊霉(Glomusmosseae)、双色蜡蘑(Laccariabicolor)、漆蜡蘑(Laccarialaccata)、Paraglomusbrazilianum、彩色豆马勃(Pisolithustinctorius)、阿米尔氏须腹菌(Rhizopogonamylopogon)、富尔维氏须腹菌(Rhizopogonfulvigleba)、浅黄根须腹菌(Rhizopogonluteolus)、长毛须腹菌(Rhizopogonvillosuli)、光硬皮马勃(Sclerodermacepa)和黄硬皮马勃(Sclerodermacitrinum))(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、(珠状巨孢囊霉(Gigasporamargarita)、聚丛球囊霉(Glomusaggregatum)、巴西球囊霉(Glomusbrasilianum)、明球囊霉(Glomusclarum)、沙漠球囊霉(Glomusdeserticola)、幼套球囊霉(Glomusetunicatum)、根内球囊霉(Glomusintraradices)、单孢球囊霉(Glomusmonosporum)、摩西球囊霉(Glomusmosseae))(可从诺维信公司(Novozymes)获得)、及其组合。

在又另一个实施例中,该一种或多种有益微生物是能够展现出杀真菌活性的微生物(例如,生物杀真菌)。生物杀真菌剂的非限制性实例描述于以下“杀真菌剂”部分中。

一种或多种除草剂<\/u>:

在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种除草剂。

除草剂的非限制实例可以是乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)抑制剂、乙酰乳酸合酶(ALS)或乙酰羟酸合酶(AHAS)抑制剂、光系统II抑制剂、光系统I抑制剂、原卟啉原氧化酶(PPO或Protox)抑制剂、类胡萝卜素生物合成抑制剂、烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶抑制剂、谷氨酰胺合酶抑制剂、二氢蝶呤酯合酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、4-羟苯基-丙酮酸-双加氧酶(4-HPPD)抑制剂、合成的植物生长素、生长素除草剂盐、生长素输送抑制剂、和核酸抑制剂、其盐及酯;外消旋混合物及其拆分异构体;及其组合。

可能的除草剂的具体实例包括2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、2,4,5-三氯苯氧乙酸(2,4,5-T)、莠灭净、氨唑草酮、环丙嘧啶酸、乙草胺、三氟羧草醚、甲草胺、莠去津、唑啶炔草、苯达松、吡草酮、治草醚、除草定、溴草腈、丁草胺、氟丙嘧草酯、丁苯草酮、唑酮草酯、氯嘧磺隆、绿麦隆、烯草酮、炔草酸、异噁草酮、氰草津、噻草酮、氰氟草酯、敌菜安、敌草净、麦草畏、禾草灵、恶唑隆、敌草隆、氟硫草定、恶唑禾草灵、吡氟禾草灵)、精吡氟禾草灵、伏草隆、氟哒嗪草酯、氟烯胺草酸戊酯、丙炔氟草胺、乙羧氟草醚、氟噻甲草酯、fomesafe、氟磺胺草醚、草甘膦、草铵膦、氟吡甲禾灵、环嗪酮、甲氧咪草烟、甲氧咪草烟、咪草烟、碘苯腈、异丙隆、异恶唑草酮、乳氟禾草灵、利谷隆、2-甲4-氯丙酸、精2-甲-4-氯丙酸、硝磺草酮、苯嗪草酮、metazochlor、methibenzuron、异丙甲草胺(和S-异丙甲草胺)、甲氧隆、赛克津、绿谷隆、丙炔恶草酮、恶草灵、乙氧氟草醚、苯敌草、丙草胺、环苯草酮、扑灭通、扑草净、扑草胺、敌稗、喔草酯、异丙草胺、吡草醚、杀草敏、吡唑特、苄草唑、哒草特、喹禾灵、精喹禾灵(例如,喹禾灵)、精喹禾灵、炔草酯-炔丙基、氰氟草酯、禾草灵甲酯、精恶唑禾草灵乙酯、精批氟禾草灵、精吡氟氯禾灵、精氟批甲禾灵)、苯嘧磺草胺、稀禾定、环草隆、西玛津、西草净、磺草酮、甲磺草胺、丁唑隆、环磺酮、吡喃草酮、特草定、特丁通、特丁津、萨科斯托明(thaxtomin)(例如像描述于美国专利号:7,989,393中的萨科斯托明)、甲氧噻草胺、肟草酮、定草醋、草达津、苯吡唑草酮(tropramezone)、及其盐和酯;外消旋混合物及其溶解的同分异构、及其组合。

包含这些除草剂中的每种的商品是可容易地获得的。组合物中的除草剂浓度通常将对应于具体除草剂的标签使用比率。

一种或多种杀真菌剂<\/u>:

在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种杀真菌剂。有用于在此描述的组合物的杀真菌剂可以是生物杀真菌剂、化学杀真菌剂、或其组合。可以选择杀真菌剂以便提供针对广谱的植物病原性真菌(包括土传真菌)的有效控制,这些植物病原性真菌尤其衍生自根肿菌纲(Plasmodiophoromycetes)、霜霉卵菌纲(Peronosporomycetes)(同义词卵菌纲(Oomycetes))、壶菌纲(Chytridiomycetes)、接合菌纲(Zygomycetes)、子囊菌纲(Ascomycetes)、担子菌纲(Basidiomycetes)以及半知菌纲(Deuteromycetes)(同义词不完全菌纲(Fungiimperfecti))。更常见的可有效地被靶向的真菌性病原体包括疫霉属、丝核菌属、镰孢属、腐霉属、拟茎点霉属或核盘菌属和层锈菌属及其组合。

生物杀真菌剂<\/u>:

在实施例中,该生物杀真菌剂可以是以下各属的细菌:放线菌属、土壤杆菌属、节杆菌属、产碱菌属、金杆菌属、固氮菌属、芽胞杆菌属、拜叶林克氏菌属、短芽孢杆菌属、伯克氏菌属、色杆菌属、梭菌属、棒形杆菌属、丛毛单胞菌属(Comomonas)、棒状杆菌属、短小杆菌属、肠杆菌属、黄杆菌属、葡糖杆菌属、嗜氢体属(Hydrogenophage)、克雷白氏菌属、甲基杆菌属、类芽孢杆菌属、巴斯德氏芽菌属、鞘氨醇杆菌属(Phingobacterium)、光杆菌属、叶瘤杆菌属、假单胞菌属、根瘤菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、贪食菌属、以及致病杆菌属。在具体实施例中,该细菌选自下组,该组由以下各项组成:解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、穿刺巴氏杆菌、巴氏杆菌、荧光假单胞菌、及其组合。

在实施例中,生物杀真菌剂可以是如下属的真菌:链格孢属、白粉寄生菌属、曲霉属、短梗霉属、白僵菌属、念珠菌属、炭疽菌属、盾壳霉属、丛赤壳属、镰孢属、胶枝霉属、绿僵菌属、梅奇酵母属、微座孢属、麝香霉属(Muscodor)、拟青霉属、Phlebiopsis、Pseudozyma、腐霉属、木霉属、核瑚菌属、细基格孢属、和轮枝孢属。在具体实施例中,该真菌是球孢白僵菌、盾壳霉、绿粘帚霉、绿僵菌(Metarrhiziumanisopliae)(在本领域中还可以称为绿僵菌、葡萄绿僵菌(Metarhiziumbrunneum)、或“绿圆叶葡萄菌(greenmuscadine)”)、白色麝香霉(Muscodoralbus)、淡紫色拟青霉、多孢木霉菌、及其组合。

可以适用于在此披露的组合物中的生物杀真菌剂的非限制性实例包括白粉寄生孢(例如,来自德国IntrachemBioGmbH&Co.KG的AQ),黄曲霉(例如来自先正达公司(Syngenta),CH的),出芽短梗霉菌(例如,来自德国bio-fermGmbH的),短小芽孢杆菌,短小芽孢杆菌分离物AQ717、NRRLB-21662(来自美国Fa.AgraQuest公司),短小芽孢杆菌分离物NRRLB-30087(来自美国Fa.AgraQuest公司),芽孢杆菌属物种分离物AQ175、ATCC55608(来自美国Fa.AgraQuest公司),芽孢杆菌属物种分离物AQ177,ATCC55609)(来自美国Fa.AgraQuest公司),枯草芽抱杆菌,枯草芽抱杆菌分离物AQ713、NRRLB-21661(在MAX和ASO下)(来自美国Fa.AgraQuest公司),枯草芽抱杆菌分离物AQ743、NRRLB-21665(来自美国Fa.AgraQuest公司),解淀粉芽孢杆菌,解淀粉芽孢杆菌FZB24(例如,来自美国诺维信生物制品有限公司(NovozymesBiologicals,Inc.)的保藏分离物NRRLB-50304和NRRLB-50349),解淀粉芽孢杆菌TJ1000(即,还称为1BE,分离物ATCCBAA-390),苏云金芽孢杆菌,苏云金芽孢杆菌分离物AQ52、NRRLB-21619(来自美国Fa.AgraQuest公司),酵母菌(Candidaoleophila),酵母菌I-82(例如,来自美国埃科根公司(EcogenInc.)的),假丝酵母(Candidasaitoana)(例如,在具有溶菌酶的混合物的中)和来自美国微弗洛公司(MicroFloCompany)(BASFSE)和爱利思达(Arysta)的),粉红粘帚霉(Clonostachysroseaf.catenulata),还称作链孢粘帚霉(Gliocladiumcatenulatum)(例如,来自芬兰维尔德拉(Verdera)的分离物J1446:),盾壳霉(例如,来自德国Prophyta的),栗疫病菌(例如来自法国CNICM的栗疫菌(Endothiaparasitica)),浅白隐球酵母(例如来自南非安克生物技术公司(AnchorBioTechnologies)的YIELD),尖孢镰刀菌(例如来自意大利S.I.A.P.A.的来自法国天然植物保护(NaturalPlantProtection)的),梅奇酵母(Metschnikowiafructicola)(例如来自以色列Agrogreen的),双胞镰孢(Microdochiumdimerum)(例如来自法国阿格拉乌兴乐公司(Agrauxine)的),白色麝香霉(Muscodoralbus),白色麝香霉分离物NRRL30547(来自美国Fa.AgraQuest公司),Muscadorroseus、Muscadorroseus分离物NRRL30548(来自美国Fa.AgraQuest公司),大伏革菌(Phlebiopsisgigantea)例如来自芬兰维尔德拉(Verdera)的),卷毛假齐马菌(Pseudozymaflocculosa)(例如来自加拿大植物产品有限公司(PlantProductsCo.Ltd.)的),寡雄腐霉(Pythiumoligandrum),寡雄腐霉DV74(例如来自捷克共和国RemesloSSRO,Biopreparaty的),黄蓝状菌(Talaromycesflavus),黄蓝状菌V117b(例如来自德国Prophyta的),棘孢木霉(Trichodermaasperellum),棘孢木霉SKT-1(例如来自日本Kumiai化工有限公司(KumiaiChemicalIndustryCo.,Ltd.)的),深绿木霉(Trichodermaatroviride),深绿木霉LC52(例如来自新西兰AgrimmTechnologies公司的),哈茨木霉(Trichodermaharzianum),哈茨木霉T-22(例如来自美国FirmaBioWorks公司的),哈茨木霉TH-35(例如来自以色列Mycontrol公司的ROOT),哈茨木霉T-39(例如来自以色列Mycontrol公司和以色列Makhteshim公司的和TRICHODERMA),哈茨木霉ICC012、哈茨木霉和绿色木霉(Trichodermaviride)(例如来自新西兰Agrimm技术公司的TRICHOPEL),哈茨木霉ICC012和绿色木霉ICC080(例如来自意大利IsagroRicerca的),多孢木霉(Trichodermapolysporum)和哈茨木霉(Trichodermaharzianum)(例如来自瑞典BINABBioInnovationAB的),康氏木霉(Trichodermastromaticum)(例如来自巴西C.E.P.L.A.C.的),绿木霉(Trichodermavirens),绿木霉GL-21(例如来自美国CertisLLC的),绿木霉G1-3例如来自诺维信公司(NovozymesBioAg,Inc)的ATCC58678),绿木霉G1-21(例如可商购自ThermoTrilogyCorporation),绿木霉和解淀粉芽孢杆菌、绿木霉G1-3和解淀粉芽孢杆菌FZB24、绿木霉G1-3和解淀粉芽孢杆菌分离物NRRLB-50349、绿木霉G1-3和解淀粉芽孢杆菌TJ1000、绿木霉G1-21和解淀粉芽孢杆菌FZB24、绿木霉G1-21和解淀粉芽孢杆菌分离物NRRLB-50349、绿木霉G1-21和解淀粉芽孢杆菌TJ1000、绿色木霉(例如来自印度Ecosense实验室(印度)Pvt.公司的来自印度T.Stanes&有限公司的F),绿色木霉TV1(例如来自意大利Agribiotecsrl的绿色木霉TV1),绿色木霉ICC080、链霉菌属物种分离物NRRLNo.B-30145(来自美国Fa.AgraQuest公司),链霉菌属物种分离物M1064(来自美国Fa.AgraQuest公司),鲜黄链霉菌(Streptomycesgalbus),鲜黄链霉菌分离物NRRL30232(来自美国Fa.AgraQuest公司),利迪链霉菌(Streptomyceslydicus),利迪链霉菌WYEC108(例如来自美国爱达荷州研究基金会(IdahoResearchFoundation)的ACTINOVATEACTINOVATEACTINOVATE的分离物ATCC55445),紫黑链霉菌(Streptomycesviolaceusniger),紫黑链霉菌YCED9(例如来自美国爱达荷州研究基金会(IdahoResearchFoundation)的和THATCH的分离物ATCC55660),链霉菌WYE53(例如来自美国爱达荷州研究基金会(IdahoResearchFoundation)的和THATCH的分离物ATCC55750)和奥德曼细基格孢(Ulocladiumoudemansii),奥德曼细基格孢HRU3(例如来自新西兰Botry-Zen公司的)。

在另外的实施例中,该生物杀真菌剂可以是植物生长激活剂或植物防御试剂,包括但不限于过敏致病性蛋白(harpin)、大虎杖(Reynoutriasachlinensis)(例如,来自美国马罗内生物创新公司(MarroneBioInnovations)的)。

化学杀真菌剂<\/u>

在某些实施例中,该杀真菌剂是一种化学杀真菌剂。可以适合用于本披露中的有用的化学杀真菌剂的代表性实例包括芳香族烃、苯并咪唑、苯并噻二唑、甲酰胺、甲酸酰胺、吗啉、苯基酰胺、膦酸酯,醌外部抑制剂(例如嗜球果伞素)、噻唑烷、苯硫脲酯、噻吩甲酰胺、以及三唑:

A)嗜球果伞素<\/u>:

嘧菌酯、甲香菌酯、丁香菌酯、醚菌胺、烯肟菌酯、氟嘧菌酯、醚菌酯、苯氧菌胺、肟醚菌胺、啶氧菌酯、唑菌胺酯、唑胺菌酯、唑菌酯、吡菌苯威、肟菌酯、2-[2-(2,5-二甲基-苯氧甲基)-苯基]-3-甲氧基-丙烯酸甲酯和2-(2-(3-(2,6-二氯苯基)-1-甲基-亚烯丙基氨基氧甲基)-苯基)-2-甲氧亚氨基-N-甲基-乙酰胺;

B)甲酰胺<\/u>:

甲酰苯胺类:苯霜灵、苯霜灵-M、麦锈灵、联苯吡菌胺(bixafen)、啶酰菌胺、萎锈灵、甲呋酰胺、环酰菌胺、氟酰胺、氟唑菌酰胺、呋吡菌胺、吡唑萘菌胺、异噻菌胺、基拉烷氧(kiralaxyl)、灭锈胺、甲霜灵、甲霜灵-M(精甲霜灵)、呋酰胺、噁霜灵、氧化萎锈灵、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、氟唑环菌胺(sedaxane)、叶枯酞、噻氟菌胺、噻酰菌胺、2-氨基-4-甲基-噻唑-5-甲酰苯胺、N-(4'-三氟甲硫基联苯基-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和N-(2-(1,3,3-三甲基丁基)-苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4-甲酰胺;

甲酸吗啉:烯酰吗啉、氟吗啉、丁吡吗啉;

苯甲酸酰胺:氟联苯菌、氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、苯酰菌胺;

其他甲酰胺:环丙酰菌胺、双氯氰菌胺(dicyclomet)、双炔酰菌胺(mandiproamid)、土霉素、硅噻菌胺和N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)环丙烷甲酰胺;

C)唑<\/u>:

三唑:阿扎康唑、联苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、烯唑醇-M、氧唑菌、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、亚胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、噁咪唑、多效唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、烯效唑;

咪唑:氰霜唑、抑霉唑、稻瘟酯、丙氯灵、氟菌唑;

D)杂环化合物<\/u>:

吡啶:氟啶胺、啶斑肟、3-[5-(4-氯-苯基)-2,3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、3-[5-(4-甲基-苯基)-2,3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶;

嘧啶:乙嘧酚磺酸酯、嘧菌环胺、二氟林、氯苯嘧啶醇、嘧菌腙、嘧菌胺、氯草定(nitrapyrin)、氟苯嘧啶醇(nuarimol)、嘧霉胺;

哌嗪:嗪氨灵;

吡咯:拌种咯、咯菌腈;

吗啉:4-十二烷基-2,6-二甲基吗啉(aldimorph)、十二环吗啉、十二环吗啉-乙酸盐、丁苯吗啉、十三吗啉;

哌啶:苯锈啶;

二甲酰亚胺:氟菌丹、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利;

非芳香族5-元杂环:噁唑菌酮、咪唑菌酮、flutianil、辛噻酮、噻菌灵、5-氨基-2-异丙基-3-氧代-4-邻-甲苯基-2,3-二氢-吡唑-1-羧硫代酸S-烯丙基酯;

其他:阿拉酸式苯-S-甲基、辛唑嘧菌胺、吲唑磺菌胺、敌菌灵(anilazin)、杀稻瘟菌素-S、敌菌丹、克菌丹、灭螨猛、棉隆、乙氧咪、哒菌酮、野燕枯、野燕枯甲基硫酸酯、氰菌胺、灭菌丹、恶喹酸、粉病灵、丙氧喹啉、咯喹酮、喹氧灵、唑嗪、三环唑、2-丁氧基-6-碘-3-丙基色满-4-酮、5-氯-1-(4,6-二甲氧基-嘧啶-2-基)-2-甲基-1H-苯并咪唑和5-氯-7-(4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑-[1,5-a]嘧啶;

E)苯并咪唑<\/u>:多菌灵。

F)其他活性物质<\/u>:

胍类:胍、多果定、多果定游离碱、双胍盐、双胍辛乙酸盐、双胍辛胺、双胍辛胺三乙酸盐、双胍三辛烷基苯磺酸盐(iminoctadine-tris(albesilate));

抗生素:春雷霉素、春雷霉素盐酸盐-水合物、链霉素、多氧霉素、井冈霉素;

硝基苯基衍生物:乐杀螨、氯硝胺、敌螨通、敌螨普、酞菌酯(nitrothal-isopropyl)、四氯硝基苯(tecnazen),

有机金属化合物:三苯锡基盐,例如薯瘟锡(fentin-acetate)、三苯锡氯(fentinchloride)或毒菌锡(fentinhydroxide);

含硫杂环基化合物:二噻农、稻瘟灵;

有机磷化合物:克瘟散(edifenphos)、藻菌磷(fosetyl)、乙磷铝(fosetyl-aluminum)、异稻瘟净(iprobenfos)、磷酸及其盐、定菌磷(pyrazophos)、甲基立枯磷(tolclofos-methyl);

有机氯化合物:百菌清、抑菌灵、双氯酚、磺菌胺、六氯苯、戊菌隆、五氯酚(pentachlorphenole)及其盐、四氯苯酞、五氯硝基苯、甲基硫菌灵、硫菌灵、对甲抑菌灵、N-(4-氯-2-硝基-苯基)-N-乙基-4-甲基-苯磺酰胺;

无机活性物质:波尔多液、乙酸铜、氢氧化铜、氯氧化铜、碱式硫酸铜、以及硫。

商业杀真菌剂最适合地根据厂商的说明书以推荐的浓度使用。

一种或多种杀昆虫剂、杀螨剂、杀线虫剂:<\/u>

在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种杀昆虫剂、杀螨剂、杀线虫剂、或其组合。用于在此描述的组合物中的杀昆虫剂、杀螨剂、和\/或杀线虫剂将对宽范围的线虫、昆虫、和螨适当地展示出活性。在此描述的杀有害生物剂可以是化学杀有害生物剂、微生物杀有害生物剂(例如,生物溶液,例如真菌杀有害生物剂、细菌杀有害生物剂等)、或其组合。

化学杀昆虫剂、杀螨剂、杀线虫剂<\/u>:

可以用于在此披露的组合物的化学杀昆虫剂、杀瞒剂和杀线虫剂的非限制性实例包括氨基甲酸酯、二酰胺、大环内酯、新烟碱类、有机磷酸酯、苯基吡唑、自除虫菊酯,多杀霉素、合成的拟除虫菊酯、季酮酸、或特特拉姆酸。

在具体实施例中,有用的化学杀昆虫剂、杀瞒剂和杀线虫剂包括氟丙菊酯、α-氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、三氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯(csfenvalcrate)、依芬普司(etofenprox)、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、噻唑磷、λ-三氯氟氰菊酯、γ-三氯氟氰菊酯、苄氯菊酯、τ-氟胺氰菊酯、四氟菊酯、ζ-氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯、七氟菊酯、硅白灵(eflusilanat)、苄螨醚(fubfenprox)、除虫菊酯、苄呋菊酯、吡虫啉、啶虫脒、噻虫嗪、烯啶虫胺、噻虫啉、呋虫胺、噻虫胺、氯噻啉、定虫隆、除虫脲、氯芬奴隆、伏虫脲、杀虫隆、双苯氟脲、氟虫脲、氟铃脲、二三氟试剂(bistrifluoron)、多氟脲、噻嗪酮、赛灭净、甲氧虫酰肼、虫酰肼、氯虫酰肼、环虫酰肼、硫丹、氟虫腈、乙虫腈、吡嗪氟虫腈(pyrafluprole)、吡啶氟虫腈(pyriprole)、氟虫双酰胺、氯虫酰胺(例如,氯虫酰胺)、氰虫酰胺、依马克丁、苯甲酸依马克、阿巴美丁、伊维菌素、米尔螨素、雷皮菌素、吡螨胺、唑螨酯、哒螨酮、喹螨醚、嘧螨醚、唑虫酰胺、开乐散、唑螨氰、丁氟螨酯、灭螨醌、嘧螨酯、联苯肼酯、杀螨隆、乙螨唑、四螨嗪、多杀菌素、三阿拉烯(triarathen)、三氯杀螨砜、克螨特、噻螨酮、溴螨酯、灭螨猛、双甲脒、氟虫吡喹,吡甲嗪、氟啶虫酰胺、蚊蝇醚、苯虫醚、溴虫腈、氰氟虫腙、茚虫威、毒死蜱、螺螨酯、螺甲螨酯、螺虫乙酯、啶虫丙醚、皮棘托拉姆(spinctoram)、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、杀线威、乙基多杀菌素、苯线磷、苯线皮考噻霍斯(fenamipclothiahos)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2,2-二氟乙基)氨基}呋喃-2(5H)-酮、硫线磷(cadusaphos)、甲萘威、克百威、灭线磷、硫双威、涕灭威、涕灭砜威、甲胺磷、灭虫威、氟啶虫胺腈、溴氰虫酰胺、tioxazofen、及其组合。

微生物杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂<\/u>:

A)真菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂<\/u>:

在具体的实施例中,该微生物杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂是一种或多种真菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂。可以用于在此披露的组合物中的真菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂的非限制性实例被描述于麦考伊(McCoy),C.W.,萨姆森(Samson),R.A.,和哥西亚斯(Coucias),D.G.“昆虫寄生性真菌(Entomogenousfungi),在“天然杀有害生物剂的CRC手册(CRCHandbookofNaturalPesticides),微生物杀有害生物剂(MicrobialPesticides),A部分,昆虫体寄生的原生动物和真菌(EntomogenousProtozoaandFungi)”,(C.M.Inoffo编著),(1988):第5卷,151-236;萨姆森,R.A.,埃文斯(Evans),H.C.,和拉格(Latge′),J.P.“昆虫病原真菌的阿特拉斯(AtlasofEntomopathogenicFungi).”(施普林格出版公司,柏林)(1988);以及大法里娅(deFaria),M.R.和赖特(Wraight),S.P.“真菌杀昆虫剂和真菌杀螨剂:一个具有配制品类型的全球覆盖和国际分类的综合列表(MycoinsecticidesandMycoacaricides:Acomprehensivelistwithworldwidecoverageandinternationalclassificationofformulationtypes)”,生物控制(Biol.Control)(2007),doi:10.1016\/j.biocontrol.2007.08.001。

在实施例中,该真菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂可以是如下属中的一种真菌:戾草露菌病属、刺束梗孢属、链格孢属、节丛孢属、米槠斑叶病菌属、子囊球菌属、曲霉属、白僵菌属、芽枝酵母属、赤壳属、雕蚀菌属(Coelemomyces)、腔壶菌属(Coelomycidium)、耳霉属(Conidiobolus)、虫草属(Cordyceps)、库奇霉属(Couchia)、蚊菌属(Culicinomyces)、辐孢属、侧齿霉属(Engyodontium)、噬虫霉属(Entomophaga)、螟蛉菌属(Entomophthora)、虫疫霉属(Erynia)、丝菌属(Filariomyces)、线黑粉菌属(Filobasidiella)、镰孢属(Fusarium)、球束梗孢属(Gibellula)、钩丝孢属(Harposporium)、金星菌属(Hesperomyces)、多毛菌属(Hirsutella)、层束梗孢属(Hymenostilbe)、肉座菌属(Hypocrella)、棒束孢属(Isaria)、轮枝菌属(Lecanicillium)、链壶菌属(Lagenidium)、细囊霉属(Leptolegnia)、团孢霉属(Massospora)、绿僵菌属(Metarhizium)、顶裂霉属(Meristacrum)、梅奇酵母属(Metschnikowia)、单顶孢属(Monacrosporium)、生膜菌属(Mycoderma)、蝇壶菌属(Myiophagus)、多腔菌属(Myriangium)、疣孢漆孢属、丛赤壳属(Nectria)、毒虫霉属、新接霉属、野村菌属(Nomuraea)、拟青霉属(Paecilomyces)、鸭蛤属(Pandora)、羽束梗孢属(Paraisaria)、巴斯德氏芽菌属、蚧侧链孢属(Pleurodesmospora)、普可尼亚属、柄丛赤壳属(Podonectria)、多头霉属(Polycephalomyces)、拟球束梗孢属(Pseudogibellula)、隔担菌属(Septobasidium)、小团孢属(Sorosporella)、拟小孢霉属(Sporodiniella)、小束梗孢菌属(Stillbella)、臂壳孢属(Tetranacrium)、多头束霉属(Tilachlidium)、弯颈霉属(Tolypocladium)、虫壳属(Torrubiella)、特伦菌属(Trenomyces)、木霉属、拟锈菌属(Uredinella)、轮枝菌属(Verticillium)、虫瘟霉属(Zoophthora)、及其组合。

在此处描述的组合物中可以用作真菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂的具体物种的非限制性实例包括决明链格孢(Alternariacassiae)、指状节丛孢、倒卵节丛孢、多孢节丛孢、指状节丛孢、寄生曲霉、球孢白僵菌、球孢白僵菌分离物ATCC-74040、球孢白僵菌分离物ATCC-74250、白顶辐霉、桑砖红镰孢(Fusariumlateritum)、腐皮镰孢霉菌(Fusariumsolani)、鳗形钩丝孢、洛氏被毛孢、明尼达被毛孢、蜡蚧轮枝菌(Lecanicilliumlecanii)、绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)(在本领域中还可以称为绿僵菌(Metarrhiziumanisopliae)、葡萄绿僵菌(Metarhiziumbrunneum)、或“绿圆叶葡萄菌(greenmuscadine)”)、绿僵菌分离物F52(还称为绿僵菌菌株52、绿僵菌菌株7、绿僵菌菌株43、绿僵菌BIO-1020、TAE-001并且保藏为DSM3884、DSM3885、ATCC90448、SD170、和ARSEF7711)(可从美国诺维信公司(NovozymesBiologicals,Inc.)获得)、柱捕单顶孢菌、嗜磁线疫霉、番茄针孢酵母、阿斯特尔氏顶裂霉(Meristacrumasterospermum)、疣孢漆斑菌、玫烟色拟青霉、玫烟色拟青霉FE991(在来自西班牙巴塞罗纳的FuturEcoBioScienceS.L.的下)、淡紫色拟青霉、穿刺巴氏杆菌、巴氏杆菌、厚垣普奇尼亚菌(Pochoniachlamydopora)、钩状木霉、哈兹木霉、绿木霉、厚壁孢子轮枝菌、蜡蚧轮枝孢、及其组合。

B)细菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂<\/u>:

在具体的实施例中,该微生物杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂是一种或多种细菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂。

在实施例中,该细菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂可以是如下属中的一种细菌:放线菌属、土壤杆菌属、节杆菌属、产碱菌属、金杆菌属、固氮菌属、芽胞杆菌属、拜叶林克氏菌属、伯克霍尔德菌属、色杆菌属、棒形杆菌属、梭菌属、丛毛单胞菌属、棒状杆菌、短小杆菌属、脱硫弧菌属、肠杆菌属、黄质菌属、葡糖杆菌属、帕氏氢噬胞菌属(Hydrogenophagespp.)、克雷白氏菌属、甲基杆菌属、类芽孢杆菌属、叶瘤杆菌属、鞘氨醇杆菌属、光杆菌属、假单胞菌属、红球菌属、沙雷氏菌属、寡养单胞菌属、链霉菌属、致病杆菌属、贪食菌属、及其组合。

在此处描述的组合物中可以用作细菌杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂的具体物种的非限制性实例包括坚强芽孢杆菌,坚强芽孢杆菌分离物I-1582(在BioNeem,Votivo中),蕈状芽孢杆菌,蕈状芽孢杆菌分离物AQ726、NRRLB-21664,伯克霍尔德菌属物种,伯克霍尔德菌属新物种rinojensis,伯克霍尔德菌属物种A396新物种rinojensis、NRRLB-50319,拾津贺色杆菌,拾津贺色杆菌新物种,拾津贺色杆菌新物种分离物NRRLB-30655,越橘色杆菌(Chromobacteriumvaccinii),越橘色杆菌分离物NRRLB-50880,紫色色杆菌,黄质菌属物种,黄质菌属物种分离物H492、NRRLB-50584,利迪链霉菌,紫黑链霉菌,及其组合。

商业杀昆虫剂、杀螨剂、和杀线虫剂最适合地根据厂商的说明书以推荐的浓度使用。

一种或多种营养素<\/u>:

在再另一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种有益营养素。用于在此描述的组合物中的营养素的非限制性实例包括维生素(例如,维生素A、维生素B复合物(即,维生素B1<\/sub>、维生素B2<\/sub>、维生素B3<\/sub>、维生素B5<\/sub>、维生素B6<\/sub>、维生素B7<\/sub>、维生素B8<\/sub>、维生素B9<\/sub>、维生素B12<\/sub>、胆碱)维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、类胡萝卜素(α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、隐黄质、叶黄素、番茄红素、玉米黄质等)、常量矿物质(例如,磷、钙、镁、钾、钠、铁等)、痕量矿物质(例如,硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒、锌等)、有机酸(例如,乙酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸、牛磺酸等)、及其组合。在具体实施例中,这些组合物可以包括磷、硼、氯、铜、铁、锰、钼、锌或其组合。

在某些实施例中,在于此描述的化合物可以包括磷的情况下,可以设想的是,可以提供任何适合的磷来源。在一个实施例中,磷来源于一种来源。在另一个实施例中,适合的磷来源包括能够被一种或多种微生物(例如,比莱青霉等)溶解的磷来源。

在一个实施例中,磷可以来源于一种磷酸岩来源。在另一个实施例中,磷可以来源于包括一种或多种磷来源的肥料。可商购的制造磷肥具有很多类型。一些常见类型是包含以下项的那些:磷矿石、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钙、过磷酸盐、三过磷酸盐、和\/或聚磷酸铵。通过在大规模肥料制造设施中对不溶天然磷矿石进行化学加工,生产所有这些肥料,并且产品是昂贵的。因此,能够减少施加至土壤的这些肥料的量同时仍然维持从土壤中摄取相同量的磷。

在再另一个实施例中,磷可以来源于一种有机磷来源。在另外具体的实施例中,该磷来源可以包括一种有机肥料。有机肥料是指来源于至少保证最低百分比的氮、磷酸盐和碳酸钾的天然来源的土壤改良剂。有机肥料的非限制性实例包括植物和动物副产品、石粉、海藻、接种物以及调节剂。这些有机肥料通常可以在园林中心和通过园艺供应公司获得。具体而言,磷有机来源可以来自骨粉、肉粉、畜肥、堆肥、污水污泥、或鸟粪、或其组合。

在再另一个实施例中,磷可以来源于磷来源的组合,这些磷来源包括但不限于磷酸岩、包括一种或多种磷来源(例如,磷酸二氢铵、、磷酸氢二铵、磷酸二氢钙、过磷酸钙、三元过磷酸钙、磷酸铵等)的肥料、一种或多种有机磷来源及其组合。

一种或多种生物刺激剂<\/u>:

在一个实施例中,在此描述的组合物可以包括一种或多种有益的生物刺激剂。生物刺激剂可以增强代谢或生理过程,例如呼吸作用、光合作用、摄取核酸、摄取离子、输送营养或其组合。生物刺激剂的非限制性实例包括海藻提取物(例如,球型褐藻)、腐植酸(例如,腐殖酸钾)、富里酸、肌醇(myo-inositol)、甘氨酸及其组合。在另一个实施例中,这些组合物包括海藻提取物、腐植酸、富里酸、肌醇、甘氨酸及其组合。

一种或多种聚合物:<\/u>

在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种聚合物。聚合物在农业产业中的非限制性用途包括输送农用化学品、去除重金属、保水和\/或输送水及其组合。宝奇(Pouci)等人,美国农业与生物科学杂志(Am.J.Agri.&Biol.Sci.),3(1):299-314(2008)。在一个实施例中,该一种或多种聚合物是天然聚合物(例如,琼脂、淀粉、藻酸盐、果胶、纤维素等)、合成聚合物、可生物降解的聚合物(例如,聚己内脂、聚交酯、聚(乙烯醇)等)或其组合。

对于有用于在此描述的组合物的聚合物的非限制性列表,参见包斯(Pouci)等人,美国农业与生物科学杂志(Am.J.Agri.&Biol.Sci.),3(1):299-314(2008)。在一个实施例中,在此描述的组合物包括纤维素、纤维素衍生物、甲基纤维素、甲基纤维素衍生物、淀粉、琼脂、藻酸盐、果胶、聚乙烯吡咯烷酮及其组合。

一种或多种润湿剂<\/u>:

在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种润湿剂。通常将润湿剂应用至土壤上,具体地是疏水性土壤上,以改进进入土壤的水的浸润和\/或穿透。该润湿剂可以是辅助剂、油、表面活性剂、缓冲剂、酸化剂、或其组合。在一个实施例中,该润湿剂是表面活性剂。在实施例中,该润湿剂是一种或多种非离子表面活性剂、一种或多种阴离子表面活性剂、或其组合。在又另一个实施例中,该润湿剂是一种或多种非离子表面活性剂。

在“表面活性剂”部分中提供了适合在此描述的组合物的表面活性剂。

一种或多种表面活性剂<\/u>:

适用于在此描述的组合物的表面活性剂可以是非离子表面活性剂(例如,半极性和\/或阴离子和\/或阳离子和\/或两性离子的)。这些表面活性剂可以湿润并乳化一处或多处土壤和\/或一处或多处泥土。可以设想的是,用于所描述的组合物中的表面活性剂对于包含在配制物中的任何微生物而言具有低的毒性。进一步预期用于所描述的组合物中的表面活性剂具有低的植物毒性(即,物质或物质的组合对植物具有的毒性程度)。可以使用单个的表面活性剂或若干表面活性剂的共混物。

阴离子表面活性剂<\/u>

阴离子表面活性剂或阴离子和非离子表面活性剂的混合物也可以用于这些组合物中。阴离子表面活性剂是在水性溶液中具有处于阴离子或带负电荷状态的亲水性部分的表面活化剂。在此描述的组合物可以包括一种或多种阴离子表面活性剂。该一种或多种阴离子表面活性剂可以是水溶性阴离子表面活性剂、水不可溶的阴离子表面活性剂,或水溶性阴离子表面活性剂和水不可溶的阴离子表面活性剂的组合。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括磺酸、硫酸酯、羧酸及其盐。水溶性阴离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基酰氨基醚硫酸盐、烷基芳基聚醚硫酸盐、烷基芳基硫酸盐、烷基芳基磺酸盐、单甘油酯硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基酰胺磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、异丙苯磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基二苯醚磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、烷基萘磺酸盐、石蜡磺酸盐、木质素磺酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、乙氧基化磺基琥珀酸盐、烷基醚磺基琥珀酸盐、烷基酰胺磺基琥珀酸盐、烷基磺基琥珀酰胺酸盐、烷基磺基乙酸盐、烷基磷酸盐、磷酸酯、烷基醚磷酸盐、酰基肌氨酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、N-酰基-N-烷基牛磺酸盐、烷基羧酸盐或其组合。

非离子表面活性剂<\/u>

非离子表面活性剂是当溶解或分散于水性介质中时不带电荷的表面活性剂。在此处描述的组合物的至少一个实施例中,使用一种或多种非离子表面活性剂,因为它们提供希望的湿润和乳化作用并且不显著抑制孢子的稳定性和活性。该一种或多种非离子表面活性剂可以是水溶性非离子表面活性剂、水不可溶的非离子表面活性剂,或水溶性非离子表面活性剂和水不可溶的非离子表面活性剂的组合。

水不可溶的非离子表面活性剂<\/u>

水不可溶的非离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基和芳基:甘油醚、乙二醇醚、乙醇酰胺、磺酰胺、醇、酰胺、醇乙氧基化物、甘油酯、乙二醇酯、甘油酯和乙二醇酯的乙氧基化物、糖基烷基多糖苷、聚氧乙烯化脂肪酸、烷醇胺冷凝物、烷醇酰胺、三级炔属乙二醇、聚氧乙烯化硫醇、羧酸酯、聚氧乙烯化聚氧丙烯乙二醇、山梨糖醇脂肪酸酯或其组合。还包括EO\/PO嵌段共聚物(EO是环氧乙烷,PO是环氧丙烷)、EO聚合物与共聚物、聚胺以及聚乙烯吡咯烷酮。

水溶性非离子表面活性剂<\/u>

水溶性非离子表面活性剂的非限制性实例包括山梨糖醇脂肪酸醇乙氧基化物和山梨糖醇脂肪酸酯乙氧基化物。

非离子表面活性剂的组合<\/u>

在一个实施例中,在此描述的组合物包括至少一种或多种非离子表面活性剂。在一个实施例中,这些组合物包括至少一种水不可溶的非离子表面活性剂和至少一种水溶性非离子表面活性剂。在仍另一个实施例中,这些组合物包括具有基本上相同长度的烃链的非离子表面活性剂的组合。

其他表面活性剂<\/u>

在另一个实施例中,在此描述的组合物还可以包括有机硅表面活性剂,其是在硅酮基和矿物油基消泡剂中用作表面活性剂的硅酮基消泡剂。在又另一个实施例中,在此描述的组合物还可以包括脂肪酸的碱金属盐(例如,脂肪酸的水溶性碱金属盐和\/或脂肪酸的水不可溶的碱金属盐)。

一种或多种抗冻剂<\/u>:

在一个实施例中,在此描述的组合物可以进一步包括一种或多种抗冻剂。抗冻剂的非限制性实例包括乙二醇、丙二醇、脲、甘油、及其组合。

方法<\/u>

在另一方面中,披露了使用在此描述的组合物的方法。在具体的实施例中,该方法包括处理植物或植物部分,包括将植物或植物部分与一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂接触。在一个实施例中,将植物或植物部分用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂进行顺序地(即,之前或之后)接触。在另一个实施例中,将植物或植物部分用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂进行同时(即,处于或约相同时间)接触。在具体的实施例中,该方法包括处理植物或植物部分,包括将植物或植物部分与一种或多种在此描述的组合物接触。

该施用步骤可以通过本领域中已知的任何方法(包括叶面和非叶面施用两者)进行。施用至植物或者植物部分的非限制性实例包括喷雾植物或植物部分、浸透植物或植物部分、滴注在植物或植物部分上、对植物或植物部分撒粉、和\/或包衣种子。在更具体的实施例中,重复该施用步骤(例如,不止一次,如在接触步骤中重复两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次等)。

在具体实施例中,该接触步骤包括向植物或植物部分经叶面施用(即,例如经由叶面喷雾、前加量装置、背囊喷雾器、喷雾罐或喷雾飞机通过喷雾施用至该植物)一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂。在再又更具体的实施例中,该接触步骤包括向植物叶经叶面施用一种或多种在此描述的组合物。

在另一个实施例中,该方法进一步包括向植物或植物部分施用一种或多种在此描述的农业上有益的成分。在一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分与一种或多种微生物孢子同时或顺序地施用。在另一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分与一种或多种萌发剂同时或顺序地施用。

一种或多种农业上有益的成分的施用还可以作为在此描述的组合物的部分施用至植物或植物部分,或独立于在此描述的一种或多种组合物而施用。在一个实施例中,将作为在此描述的一种或多种组合物的部分的一种或多种农业上有益的成分施用至植物或植物部分。在另一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分独立于一种或多种在此描述的组合物施用至植物或植物部位。在一个实施例中,向植物或植物部分施用一种或多种农业上有益的成分的步骤发生在将植物或植物部分与一种或多种在此描述的组合物接触的步骤之前、过程中、之后或与其同时发生。

在又另一方面,在此描述了用于诱导微生物孢子萌发的方法。在一个实施例中,该方法包括诱导微生物萌发,包括向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂,其中当向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂后,在一种或多种萌发剂的存在下,相比于在植物或植物部分上仅经叶面施用一种或多种微生物孢子(即,没有施用一种或多种萌发剂),该一种或多种微生物孢子展现出了在植物或植物部分上增加的萌发。在此使用的,术语“增加的萌发”、“增强的萌发”、和\/或其变体意思是指,与萌发剂不存在下萌发的、所应用的孢子的比例比较时,在萌发剂存在下萌发的、所应用的孢子的比例增加;与萌发剂不存在下所应用的孢子萌发速度比较时,在萌发剂存在下的、所应用的孢子萌发速度增加,或其组合。在更具体的实施例中,用于诱导微生物孢子萌发的方法包括向植物叶经叶面施用一种或多种细菌孢子和一种或多种萌发剂。在又另一个实施例中,用于诱导微生物孢子萌发的方法包括经叶面施用在此描述的一种或多种组合物。

该方法可以进一步包括使该植物或植物部分经受与该一种或多种微生物孢子或一种或多种萌发剂同时或顺序施用的一种或多种农业上有益的成分。在一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分与一种或多种微生物孢子同时或顺序地施用。在另一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分与一种或多种萌发剂同时或顺序地施用。一种或多种农业上有益的成分的施用还可以作为在此描述的组合物的部分施用至植物或植物部分,或独立于在此描述的一种或多种组合物而施用。在一个实施例中,将作为在此描述的一种或多种组合物的部分的一种或多种农业上有益的成分施用至植物或植物部分。在另一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分独立于一种或多种在此描述的组合物施用至植物或植物部位。在一个实施例中,向植物或植物部分施用一种或多种农业上有益的成分的步骤发生在将植物或植物部分与一种或多种在此描述的组合物接触的步骤之前、过程中、之后或与其同时发生。

在另一方面,在此描述了用于处理土壤的方法。在一个实施例中,该方法包括将土壤与一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂接触。在另一个实施例中,该方法包括将土壤与一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂接触,并且在处理过的土壤中种植植物或植物部分。在再又另一个实施例中,该方法包括将土壤与在此描述的组合物中的一种或多种接触,并且在处理过的土壤中种植植物或植物部分。

在实施例中,该接触步骤可以通过本领域中已知的任何方法进行。接触土壤的非限制性实例包括喷雾土壤、浸透土壤、滴注到土壤上、和\/或对土壤撒粉。在一个实施例中,重复该接触步骤(例如,不止一次,如将该接触步骤重复两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次等)。在一个实施例中,该接触步骤包括将土壤与一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂顺序地接触。在另一个实施例中,该接触步骤包括将土壤与一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂同时接触。在具体实施例中,该接触步骤包括将在此描述的组合物中的一种或多种引入土壤中。

该接触步骤可以发生在该植物或植物部分生长过程中的任何时间。在一个实施例中,该接触步骤发生在植物或植物部分开始生长之前。在另一个实施例中,该接触步骤发生在该植物或植物部分已经开始生长之后。

在另一个实施例中,该方法进一步包括种植植物或植物部分的步骤。该种植步骤可以发生在该接触步骤之前、之后或过程中。在一个实施例中,该种植步骤发生在该接触步骤之前。在另一个实施例中,该种植步骤发生在该接触步骤过程中(例如,该种植步骤与该接触步骤同时发生、该种植步骤与该接触步骤基本上同时发生等)。在再另一个实施例中,该种植步骤发生在该接触步骤之后。

该方法可以进一步包括使该土壤经受与该一种或多种微生物孢子或一种或多种萌发剂同时或顺序施用的一种或多种农业上有益的成分。在一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分与一种或多种微生物孢子同时或顺序地施用。在另一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分与一种或多种萌发剂同时或顺序地施用。一种或多种农业上有益的成分的施用还可以作为在此描述的组合物的部分施用至土壤,或独立于在此描述的一种或多种组合物而施用。在一个实施例中,将作为在此描述的组合物中的一种或多种的一种或多种农业上有益的成分施用至土壤。在另一个实施例中,将一种或多种农业上有益的成分独立于一种或多种在此描述的组合物施用至土壤。在一个实施例中,向植物或植物部分施用一种或多种农业上有益的成分的步骤发生在将植物或植物部分与一种或多种在此描述的组合物接触的步骤之前、过程中、之后或与其同时发生。

在一个实施例中,使土壤经受一种或多种农业上有益的成分的步骤与接触步骤顺序发生或与其同时发生。在一个实施例中,使土壤经受一种或多种如在此描述的农业上有益的成分的步骤发生在接触步骤之前。在另一个实施例中,使土壤经受一种或多种如在此描述的农业上有益的成分的步骤发生在接触步骤过程中。在又另一个实施例中,使土壤经受一种或多种如在此描述的农业上有益的成分的步骤发生在接触步骤之后。在又另一个实施例中,使土壤经受一种或多种如在此描述的农业上有益的成分的步骤与接触步骤(例如,用在此描述的组合物中的一种或多种接触土壤等)同时发生。

在此描述的方法适用于豆科植物或植物部分和非豆科植物或植物部分。在具体实施例中,这些植物或植物部分选自下组,该组由以下各项组成:苜蓿、稻、小麦、大麦、黑麦、燕麦、棉花、油菜、向日葵、花生、玉米、马铃薯、甘薯、豆、豌豆、鹰嘴豆、扁豆、菊苣、莴苣、苦苣、甘蓝、抱子甘蓝、甜菜、欧洲防风草、芜菁、菜花、西兰花、芜菁、萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、辣椒、芹菜、胡萝卜、南瓜、西葫芦、绿皮西葫芦、黄瓜、苹果、梨、西瓜、柑橘、草莓、葡萄、树莓、菠萝、大豆、烟草、番茄、高粱以及甘蔗。

种子包衣<\/u>

在另一方面,可以将种子用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂进行处理。在具体实施例中,可以将种子用在此描述的组合物中的一种或多种进行处理。种子包衣方法是本领域中熟知的。在一个实施例中,将种子用如在此描述的干燥的组合物进行包衣。在另一个实施例中,将种子用如在此描述的液体组合物进行包衣。在又另一个实施例中,将在此描述的组合物用种子处理混合物进行配制(例如,混合、添加等)。

种子的包衣能以按若干方法发生,但是优选地经由喷雾或滴加。喷雾和滴加处理可以通过配制在此描述的组合物并经由连续处理系统(其被校准,以与种子的连续流成比例的预定义速率施加处理)(例如滚筒式处理器)将该一种或多种组合物喷雾或滴加至一种或多种的种子上。也可以利用间歇式系统,在这种系统中预定批量的种子和如在此描述的一种或多种组合物被递送至混合器中。用于实施这些过程的系统和仪器可商购自许多供应商,例如拜耳作物科学(BayerCropScience)(古斯塔夫森公司(Gustafson))。

在另一个实施例中,该处理必需包衣种子。一种这样的过程涉及用在此描述的一种或多种组合物包衣圆形容器的内壁,添加种子,然后旋转该容器,以使得这些种子与该壁和该一种或多种组合物接触,即一种在本领域中称为“容器包衣(containercoating)”的过程。可以通过包衣方法的组合来包衣种子。浸渍典型地必需使用在此描述的组合物的液体形式。例如,可以将种子浸渍约1分钟至约24小时(例如,持续至少1min、5min、10min、20min、40min、80min、3hr、6hr、12hr、24hr)。

在某些实施例中,包衣有在此描述的组合物中的一种或多种的一种或多种的种子将包括1x101<\/sup>-1x108<\/sup>个集落形成单位的一种或多种微生物菌株\/种子,更优选地1x102<\/sup>-1x106<\/sup>个集落形成单位的一种或多种微生物菌株\/种子。

本披露的实施例进一步通过以下编号的段落来定义:

1.一种组合物,包括:

a.载体;

b.一种或多种微生物孢子;和

c.一种或多种萌发剂,

其中该组合物基本上是干燥的组合物。

2.如段落1所述的组合物,其中该萌发剂选自下组,该组由以下各项组成:乳酸盐、乳糖、碳酸氢盐、果糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甘胺酸、肌苷、牛磺胆酸盐、及其组合。

3.如段落1所述的组合物,其中该萌发剂是L-天冬酰胺、葡萄糖、果糖、和钾离子的一种组合(AGFK)。

4.如段落1所述的组合物,其中该一种或多种微生物孢子是一种或多种细菌孢子。

5.如段落4所述的组合物,其中该一种或多种细菌芽孢是选自下属的细菌,这些属由以下各项组成:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、Vulcanobacillus、及其组合。

6.如段落4所述的组合物,其中该一种或多种细菌孢子是一种或多种芽孢杆菌属孢子。

7.如段落6所述的组合物,其中该一种或多种芽孢杆菌属孢子选自下组,该组由以下各项组成:嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)、蜂房芽孢杆菌(Bacillusalvei)、噬胺芽胞杆菌(Bacillusaminovorans)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、解硫胺素芽胞杆菌(Bacillusaneurinolyticus)、海水芽孢杆菌(Bacillusaquaemaris)、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)、嗜硼芽孢杆菌(Bacillusboroniphilius)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、热容芽孢杆菌(Bacilluscaldolyticus)、中间芽胞杆菌(Bacilluscentrosporus)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、黄热芽孢杆菌(Bacillusflavothermus)、纺锤芽孢杆菌(Bacillusfusiformis)、球芽孢杆菌(Bacillusglobigii)、地狱芽孢杆菌(Bacillusinfernus)、幼虫芽孢杆菌(Bacilluslarvae)、侧孢芽孢杆菌(Bacilluslaterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、马铃薯杆菌(Bacillusmesentericus)、胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillusmycoides)、纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)、泛养芽胞杆菌(Bacilluspantothenticus)、多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)、伪炭疽芽孢杆菌(Bacilluspseudoanthracis)、短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)、施氏芽胞杆菌(Bacillusschlegelii)、球形芽孢杆菌(Bacillussphaericus)、耐热芽孢杆菌(Bacillussporothermodurans)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophillus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、嗜热葡糖苷酶芽胞杆菌(Bacillusthermoglucosidasius)、苏芸金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)、Bacillusvulgatis、韦氏芽孢杆菌(Bacillusweihenstephanensis)、及其组合。

8.如段落6所述的组合物,其中该一种或多种芽孢杆菌属孢子选自下组,该组由以下各项组成:具有保藏登录号NRRLB-21662的短小芽孢杆菌分离物AQ717、具有保藏登录号NRRLB-30087的短小芽孢杆菌、具有保藏登录号ATCC55608的芽孢杆菌属物种分离物AQ175、具有保藏登录号ATCC55609的芽孢杆菌属物种分离物AQ177、具有保藏登录号NRRLB-21661的枯草芽孢杆菌分离物AQ713、具有保藏登录号NRRLB-21665的枯草芽孢杆菌分离物AQ743、具有保藏登录号NRRLB-50304的解淀粉芽孢杆菌、具有保藏登录号NRRLB-50349的解淀粉芽孢杆菌、具有保藏登录号ATCCBAA-390的解淀粉芽孢杆菌TJ1000、具有保藏登录号NRRLB-21619的苏芸金芽胞杆菌分离物AQ52、保藏登录号ATCC202152的枯草芽孢杆菌解淀粉变种,及其组合。

9.如段落1所述的组合物,其中该组合物进一步包括一种或多种农业上有益的成分。

10.如段落9所述的组合物,其中该一种或多种农业上有益的成分是一种或多种生物活性成分。

11.如段落10所述的组合物,其中该一种或多种生物活性成分选自下组,该组由以下各项组成:一种或多种植物信号分子、一种或多种有益微生物、及其组合。

12.如段落1所述的组合物,其中该组合物进一步包括一种或多种植物信号分子。

13.如段落12所述的组合物,其中该一种或多种植物信号分子是脂质几丁寡糖(LCO)。

14.如段落13所述的组合物,其中该LCO是合成的。

15.如段落13所述的组合物,其中该LCO是重组的。

16.如段落13所述的组合物,其中该LCO是天然存在的。

17.如段落13所述的组合物,其中LCO获得自选自以下项的根瘤菌物种:根瘤菌属、慢生根瘤菌属、中华根瘤菌属、固氮根瘤菌属、或其组合。

18.如段落13所述的组合物,其中该LCO获得自慢生型大豆根瘤菌。

19.如段落13所述的组合物,其中该LCO获得自一种丛枝菌根真菌。

20.如段落12所述的组合物,其中该植物信号分子是一种几丁质化合物。

21.如段落20所述的组合物,其中该几丁质化合物是一种壳寡糖(CO)。

22.如段落21所述的组合物,其中该CO是合成的。

23.如段落21所述的组合物,其中该CO是重组的。

24.如段落21所述的组合物,其中该CO是天然存在的。

25.如段落12所述的组合物,其中该植物信号分子是一种类黄酮。

26.如段落25所述的组合物,其中该类黄酮是木犀草素、芹菜素、柑橘黄酮、槲皮素、山奈酚、杨梅素、漆黄素、异鼠李素、霍香黄酮醇、甲基鼠李素、橙皮素、柚皮素、圣草素、高圣草素、黄杉素、二氢槲皮素、二氢山萘酚、染料木素、大豆黄酮、黄豆黄素、儿茶素、没食子儿茶素、儿茶素3-没食子酸酯、没食子儿茶素3-没食子酸酯、表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素3-没食子酸酯、表没食子儿茶素3-没食子酸酯、氰化、翠雀花素、锦葵色素、天竺葵色素、芍药花青素、甲花翠素、或其衍生物。

27.如段落12所述的组合物,其中该植物信号分子是茉莉酸或其一种衍生物。

28.如段落12所述的组合物,其中该植物信号分子是亚油酸或其一种衍生物。

29.如段落12所述的组合物,其中该植物信号分子是亚麻酸或其一种衍生物。

30.如段落12所述的组合物,其中该植物信号分子是一种卡里金。

31.一种用于处理植物或植物部分的方法,该方法包括用以下各项接触植物或植物部分

a.一种或多种微生物孢子;和

b.一种或多种萌发剂。

32.如段落31所述的方法,其中该接触包括向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂。

33.如段落31所述的方法,其中该萌发剂选自下组,该组由以下各项组成:乳酸盐、乳糖、碳酸氢盐、果糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甘胺酸、肌苷、牛磺胆酸盐、及其组合。

34.如段落31所述的方法,其中该萌发剂是L-天冬酰胺、葡萄糖、果糖、和钾离子的一种组合(AGFK)。

35.如段落31所述的方法,其中该一种或多种微生物孢子是一种或多种细菌孢子。

36.如段落35所述的方法,其中该一种或多种细菌芽孢是选自下属的细菌,这些属由以下各项组成:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、Vulcanobacillus、及其组合。

37.如段落35所述的方法,其中该一种或多种细菌孢子是一种或多种芽孢杆菌属孢子。

38.如段落37所述的方法,其中该一种或多种芽孢杆菌属孢子选自下组,该组由以下各项组成:嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)、蜂房芽孢杆菌(Bacillusalvei)、噬胺芽胞杆菌(Bacillusaminovorans)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、解硫胺素芽胞杆菌(Bacillusaneurinolyticus)、海水芽孢杆菌(Bacillusaquaemaris)、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)、嗜硼芽孢杆菌(Bacillusboroniphilius)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、热容芽孢杆菌(Bacilluscaldolyticus)、中间芽胞杆菌(Bacilluscentrosporus)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、黄热芽孢杆菌(Bacillusflavothermus)、纺锤芽孢杆菌(Bacillusfusiformis)、球芽孢杆菌(Bacillusglobigii)、地狱芽孢杆菌(Bacillusinfernus)、幼虫芽孢杆菌(Bacilluslarvae)、侧孢芽孢杆菌(Bacilluslaterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、马铃薯杆菌(Bacillusmesentericus)、胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillusmycoides)、纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)、泛养芽胞杆菌(Bacilluspantothenticus)、多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)、伪炭疽芽孢杆菌(Bacilluspseudoanthracis)、短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)、施氏芽胞杆菌(Bacillusschlegelii)、球形芽孢杆菌(Bacillussphaericus)、耐热芽孢杆菌(Bacillussporothermodurans)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophillus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、嗜热葡糖苷酶芽胞杆菌(Bacillusthermoglucosidasius)、苏芸金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)、Bacillusvulgatis、韦氏芽孢杆菌(Bacillusweihenstephanensis)、及其组合。

39.如段落37所述的方法,其中该一种或多种芽孢杆菌属孢子选自下组,该组由以下各项组成:具有保藏登录号NRRLB-21662的短小芽孢杆菌分离物AQ717、具有保藏登录号NRRLB-30087的短小芽孢杆菌、具有保藏登录号ATCC55608的芽孢杆菌属物种分离物AQ175、具有保藏登录号ATCC55609的芽孢杆菌属物种分离物AQ177、具有保藏登录号NRRLB-21661的枯草芽孢杆菌分离物AQ713、具有保藏登录号NRRLB-21665的枯草芽孢杆菌分离物AQ743、具有保藏登录号NRRLB-50304的解淀粉芽孢杆菌、具有保藏登录号NRRLB-50349的解淀粉芽孢杆菌、具有保藏登录号ATCCBAA-390的解淀粉芽孢杆菌TJ1000、具有保藏登录号NRRLB-21619的苏芸金芽胞杆菌分离物AQ52、保藏登录号ATCC202152的枯草芽孢杆菌解淀粉变种,及其组合。

40.如段落31-39所述的方法,其中该一种或多种微生物孢子在一种或多种萌发剂之前、之后、或同时与植物或植物部分接触。

41.如段落31-40所述的方法,其中在该一种或多种萌发剂接触植物或植物部分之前,该一种或多种微生物孢子接触植物或植物部分。

42.如段落31-40所述的方法,其中在该一种或多种萌发剂接触植物或植物部分之后,该一种或多种微生物孢子接触植物或植物部分。

43.如段落31-40所述的方法,其中该一种或多种萌发剂和该一种或多种微生物孢子同时接触植物或植物部分。

44.如段落31所述的方法,其中该方法进一步包括向植物或植物部分施用一种或多种农业上有益的成分。

45.如段落44所述的方法,其中该向植物或植物部分施用一种或多种农业上有益的成分的步骤与将该植物或植物部分与一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂接触的步骤同时或顺序发生。

46.如段落45所述的方法,其中该农业上有益的成分是一种或多种生物活性成分。

47.如段落46所述的方法,其中该一种或多种生物活性成分选自下组,该组由以下各项组成:一种或多种植物信号分子、一种或多种有益微生物、及其组合。

48.如段落44所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分是一种或多种选自下组的植物信号分子,该组由以下各项组成:LCO、CO、几丁质化合物、类黄酮、茉莉酸、茉莉酸甲酯、亚油酸、亚麻酸、卡里金及其组合。

49.如段落44所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种CO。

50.如段落44所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种LCO。

51.如段落44所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种有益微生物。

52.如段落51所述的方法,其中该一种或多种有益微生物包括一种或多种固氮微生物、一种或多种解磷微生物、一种或多种菌根真菌或其组合。

53.一种用于诱导微生物孢子萌发的方法,该方法包括向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂,其中当向植物或植物部分经叶面施用一种或多种微生物孢子和一种或多种萌发剂后,在一种或多种萌发剂的存在下,相比于在不存在一种或多种萌发剂下向植物或植物部分上经叶面施用一种或多种微生物孢子,该一种或多种微生物孢子展现出了在植物或植物部分上增加的萌发。

54.如段落53所述的方法,其中该萌发剂选自下组,该组由以下各项组成:乳酸盐、乳糖、碳酸氢盐、果糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甘胺酸、肌苷、牛磺胆酸盐、及其组合。

55.如段落53所述的方法,其中该萌发剂是L-天冬酰胺、D-葡萄糖、D-果糖、和钾离子的一种组合(AGFK)。

56.如段落53所述的方法,其中该一种或多种微生物孢子是一种或多种细菌孢子。

57.如段落56所述的方法,其中该一种或多种细菌芽孢是选自下属的细菌,这些属由以下各项组成:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、Vulcanobacillus、及其组合。

58.如段落56所述的方法,其中该一种或多种细菌孢子是一种或多种芽孢杆菌属孢子。

59.如段落58所述的方法,其中该一种或多种芽孢杆菌属孢子选自下组,该组由以下各项组成:嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)、蜂房芽孢杆菌(Bacillusalvei)、噬胺芽胞杆菌(Bacillusaminovorans)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、解硫胺素芽胞杆菌(Bacillusaneurinolyticus)、海水芽孢杆菌(Bacillusaquaemaris)、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)、嗜硼芽孢杆菌(Bacillusboroniphilius)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、热容芽孢杆菌(Bacilluscaldolyticus)、中间芽胞杆菌(Bacilluscentrosporus)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、黄热芽孢杆菌(Bacillusflavothermus)、纺锤芽孢杆菌(Bacillusfusiformis)、球芽孢杆菌(Bacillusglobigii)、地狱芽孢杆菌(Bacillusinfernus)、幼虫芽孢杆菌(Bacilluslarvae)、侧孢芽孢杆菌(Bacilluslaterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、马铃薯杆菌(Bacillusmesentericus)、胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillusmycoides)、纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)、泛养芽胞杆菌(Bacilluspantothenticus)、多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)、伪炭疽芽孢杆菌(Bacilluspseudoanthracis)、短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)、施氏芽胞杆菌(Bacillusschlegelii)、球形芽孢杆菌(Bacillussphaericus)、耐热芽孢杆菌(Bacillussporothermodurans)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophillus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、嗜热葡糖苷酶芽胞杆菌(Bacillusthermoglucosidasius)、苏芸金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)、Bacillusvulgatis、韦氏芽孢杆菌(Bacillusweihenstephanensis)、及其组合。

60.如段落58所述的方法,其中该一种或多种芽孢杆菌属孢子选自下组,该组由以下各项组成:具有保藏登录号NRRLB-21662的短小芽孢杆菌分离物AQ717、具有保藏登录号NRRLB-30087的短小芽孢杆菌、具有保藏登录号ATCC55608的芽孢杆菌属物种分离物AQ175、具有保藏登录号ATCC55609的芽孢杆菌属物种分离物AQ177、具有保藏登录号NRRLB-21661的枯草芽孢杆菌分离物AQ713、具有保藏登录号NRRLB-21665的枯草芽孢杆菌分离物AQ743、具有保藏登录号NRRLB-50304的解淀粉芽孢杆菌、具有保藏登录号NRRLB-50349的解淀粉芽孢杆菌、具有保藏登录号ATCCBAA-390的解淀粉芽孢杆菌TJ1000、具有保藏登录号NRRLB-21619的苏芸金芽胞杆菌分离物AQ52、保藏登录号ATCC202152的枯草芽孢杆菌解淀粉变种,及其组合。

61.如段落53所述的方法,其中该方法进一步包括使植物或植物部分经受一种或多种农业上有益的成分。

62.如段落61所述的方法,其中该农业上有益的成分是一种或多种生物活性成分。

63.如段落62所述的方法,其中该一种或多种生物活性成分选自下组,该组由以下各项组成:一种或多种植物信号分子、一种或多种有益微生物、及其组合。

64.如段落61所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分是一种或多种选自下组的植物信号分子,该组由以下各项组成:LCO、CO、几丁质化合物、类黄酮、茉莉酸、茉莉酸甲酯、亚油酸、亚麻酸、卡里金及其组合。

65.如段落61所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种CO。

66.如段落61所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种LCO。

67.如段落61所述的方法,其中该一种或多种农业上有益的成分包括一种或多种有益微生物。

68.如段落67所述的方法,其中该一种或多种有益微生物包括一种或多种固氮微生物、一种或多种解磷微生物、一种或多种菌根真菌或其组合。

69.如以上段落中任一项所述的方法,其中该植物或植物部分是一种豆科植物或植物部分。

70.如以上段落中任一项所述的方法,其中该植物或植物部分是一种大豆植物或植物部分。

71.如以上段落中任一项所述的方法,其中该植物或植物部分是一种非豆科植物或植物部分。

72.如以上段落中任一项所述的方法,其中该植物或植物部分是一种玉米植物或植物部分。

73.包衣有如权利要求1所述的组合物的种子。

实例<\/u>

以下实例是出于说明性目的而提供的,并且不旨在限制如在此要求的实施例的范围。技术人员想到的所例举实例的任何变型旨在落入本披露的范围内。

材料与方法

细菌菌株:<\/u>

枯草芽孢杆菌解淀粉变种NRRLB-50349

枯草芽孢杆菌解淀粉变种ATCC登录号:202152(TrigoCor)

实例1:在10mM萌发剂中在37℃下,芽胞杆菌属孢子的萌发<\/u>

芽胞杆菌属起始培养物生长于营养肉汤加酵母提取物(克兰(Crane)等人,2013)中,然后以1:1000转移至修饰的谢弗产孢培养基(Schaeffer’ssporulationmedium)(尼科尔森(Nicholson)和塞特洛(Setlow)1990)中,该产孢培养基包含每升2.012gKCl、0.492gMgSO4<\/sub>·7H2<\/sub>0、无NaOH、以及0.0197gMnCl2<\/sub>·4H2<\/sub>0,并且生长72h。将所有的培养物在斜面烧瓶中于50mL等分试样里在37℃下生长,伴随225RPM震荡。将液体培养物在4℃下以10,000RCF旋转10分钟,在冷去离子水中洗涤10次,并且重悬浮于5mL冷去离子水中。为了去除营养性细胞,将培养物在冰上用溶菌酶(终浓度50μg\/mL)处理10min,随后在冰上进行六轮15秒的超声处理,然后用冷去离子水洗涤两次。将孢子制剂在4℃下储存于去离子水中,并且在使用之前用冷去离子水洗涤一次。除非另外指出,将孢子重悬浮于pH7.41的25mMHEPES(西格玛奥瑞奇(Sigma-Aldrich)公司,圣路易斯,密苏里州)中,以产生108<\/sup>CFUs\/mL的终浓度。如通过相差显微术所验证的,纯化的孢子培养物包含超过98%的相亮孢子(phase-brightspore)和极小的细胞碎片。

在pH7.41的25mMHEPES中制备氯化铽(1mM)(西格玛奥瑞奇(Sigma-Aldrich)公司,圣路易斯,密苏里州)和所有的萌发剂溶液,并且如在单独实验中提到的进行添加。将90μLTrigoCor孢子与10μL的每种萌发剂(100mM,终浓度10mM)进行混合,并且在96孔板(赛默科技(ThermoScientific),沃尔瑟姆,马萨诸塞州)上在37℃下孵育1、10、30、60、或120分钟。制备样品,这样使得所有孵育同时完成并且一起进行分析。针对每种测试的萌发剂,每孵育时间装载两种孢子-萌发剂混合物。所测试的萌发剂是D-葡萄糖、D-果糖、KBr、KCl、L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-脯氨酸、L-缬氨酸、以及萌发剂组合AGFK(等摩尔浓度的L-天冬酰胺、D-葡萄糖、D-果糖、和KCl)、或作为对照的HEPES。在向所有的样品中添加100μL氯化铽之后,如以下所解释的测量荧光。测定重复两次,结果具有可比性。

在每个读板仪测量时间,将两个90μL孢子样品(该样品经高压釜处理60min,与10μLHEPES混合)连同包含所有萌发剂和HEPES的混合物的样品添加为板中的额外的样品,并且与100μL氯化铽混合。纯去离子水的最终样品也包含在板中,并且这些样品与板中的所有其他样品一起测量。根据伊(Yi)和塞特洛(Setlow)(2010),使用Synergy4读板仪(伯腾仪器有限公司(BioTekInstrumentsInc.),威努斯基,

佛蒙特州)测量在545nm发射并且在273nm激发时的荧光。该包含萌发剂混合物和去离子水的样品作为阴性对照,并且在任何试验中不产生任何显著的荧光。通过用相对荧光单位(RFU)除以高压釜处理过的细胞(这些细胞由于溶胞作用(杨(Yang)和庞塞(Ponce)2009)已经释放了其所有的吡啶二羧酸(DPA))的相应的平均RFU来计算每个样品在每个时间点的孢子萌发百分比,并且提供于表1中。使用相差显微术确认孢子萌发结果(数据未示出)。

表1.在10mM萌发剂中在37℃下,TrigoCor孢子的萌发百分比。x<\/sup>

x<\/sup>使用氯化铽测定估算萌发,并且通过将每个样品的RFU除以已经释放其所有DPA的同时所测量的样品的平均RFU来计算萌发百分比。所示出的数值表示平均萌发百分比±标准差。

y<\/sup>L-天冬酰胺、D-葡萄糖、D-果糖、以及氯化钾的等摩尔溶液。

z<\/sup>HEPES缓冲液。在该缓冲液中制备所有的萌发剂和芽胞杆菌属孢子。

如表1所示,相比于对照,在AGFK、L-丙氨酸、或D-葡萄糖的存在下孢子萌发百分比增加。

实例2:在10mM或100mM萌发剂中在37℃下,芽胞杆菌属孢子的<\/u>萌发<\/u>

按照实例1进行以下方案,伴随以下修改:

在pH7.41的25mMHEPES中制备氯化铽(1mM)(西格玛奥瑞奇(Sigma-Aldrich)公司,圣路易斯,密苏里州)和所有的萌发剂溶液,并且如在单独实验中提到的进行添加。将450μLTrigoCor孢子与50μL的每种萌发剂(100mM和1M,终浓度10mM和100mM)混合,并且在37℃下孵育。针对每种萌发剂制备两个样品,并且所测试的萌发剂是D-葡萄糖、L-丙氨酸、AGFK、以及葡萄糖和丙氨酸的等摩尔溶液、或作为对照的HEPES。在孵育10、30、60、以及120分钟后,从每个管中将100μL转移至96孔板中。针对孢子萌发的初始测量,未混有萌发剂并保持在4℃的孢子的两个100μL样品与已经孵育10分钟的样品一起分析。紧随每个样品时间之后,将100μL氯化铽添加至所有样品中,并且如之前解释的测量荧光。测定重复两次,结果具有可比性。

通过用相对荧光单位(RFU)除以高压釜处理过的细胞(这些细胞由于溶胞作用(杨(Yang)和庞塞(Ponce)2009)已经释放了其所有的吡啶二羧酸(DPA))的相应的平均RFU来计算每个样品在每个时间点的孢子萌发百分比,并且提供于表2中。使用相差显微术确认孢子萌发结果(数据未示出)。

表2.在10或100mM萌发剂中在37℃下,TrigoCor孢子的萌发百分比。w<\/sup>

w<\/sup>使用氯化铽测定估算萌发,并且通过将每个样品的RFU除以已经释放其所有DPA的同时所测量的样品的平均RFU来计算萌发百分比。所有样品的起始萌发百分比是2±0。所示出的数值表示平均萌发百分比±标准差。

x<\/sup>L-天冬酰胺、D-葡萄糖、D-果糖、以及氯化钾的等摩尔溶液。

y<\/sup>L-丙氨酸和D-葡萄糖的等摩尔溶液。

z<\/sup>HEPES缓冲液。在该缓冲液中制备所有的萌发剂和芽胞杆菌属孢子。

如表2所示,相比于对照,在AGFK、L-丙氨酸、或D-葡萄糖的存在下孢子萌发百分比增加。虽然处于两种浓度的AGFK都是优良的增强剂,但是丙氨酸和葡萄糖组合协同工作,并且与每种单独材料相比增加了萌发增强的应答。增加的增强剂浓度增加了萌发速度。

实例3:在10mM萌发剂中在室温下,芽胞杆菌属孢子的萌发。<\/u>

如实例1所述制作孢子制剂。

在96孔板(美国科学公司(USAScientific,Inc.),奥兰多,佛罗里达州)中,通过将160μL的孢子与40μL萌发剂(50mM,终浓度10mM)混合并且在室温下(24℃-26℃)孵育6h来进行孢子萌发,该6h先前被定义为用来进行大部分的孢子萌发所需要的时间(数据未示出)。分析每个处理的三次重复,并且该测定进行两次,结果具有可比性。所测试的萌发剂是AGFK以及L-丙氨酸和D-葡萄糖的等摩尔溶液,并且添加单独的HEPES作为对照。使用复合显微镜(卡尔·蔡司公司(CarlZeiss),上科亨,德国)的相差设置估算孢子萌发百分比,并且提供于表3中。对表示每次重复最少总计200个孢子的视图的至少5个区进行分析。

表3.在10mM萌发剂中在室温下,芽胞杆菌属孢子的萌发百分比。w<\/sup>

w<\/sup>在孵育6h后,使用相差显微术估算萌发。所示出的数值表示平均萌发百分比±标准差。

x<\/sup>L-天冬酰胺、D-葡萄糖、D-果糖、以及氯化钾的等摩尔溶液。

y<\/sup>L-丙氨酸和D-葡萄糖的等摩尔溶液。

z<\/sup>HEPES缓冲液。在该缓冲液中制备所有的萌发剂和芽胞杆菌属孢子。

如表3所示,相比于对照情况,在萌发增强剂AGFK或丙氨酸+葡萄糖的存在下,增加了如通过显微镜检查法所看到的萌发百分比。

实例4:使用萌发剂在板表面上进行的孢子萌发<\/u>

如实例1所述制作孢子制剂。

将孢子重悬浮于水中,并且喷雾到如之前描述的‘标准’冬小麦的两个盆上(克兰(Crane)等人,2013)。在应用时,花穗处于花期(Feekes10.53)。用无菌的去离子水喷雾第二组的两个盆。允许小麦花穗干燥4.5h,然后去除每盆4个花穗用于如以下描述的芽孢杆菌属孢子群落的量化和表征。用约24mL的HEPES或AGFK(100mM)喷雾每种处理的一个盆。允许小麦花穗干燥3h,然后使用家用喷雾器(ConsolidatedPlastics,斯托,俄亥俄州),用去离子水的细雾进行喷雾,并且用塑料袋(AEP工业公司(AEPIndustriesInc.),皮博迪,马萨诸塞州)覆盖,以生产诱导孢子萌发的潮湿环境。在24h后去除塑料袋,并且去除每盆5个花穗,用于芽孢杆菌属孢子群落的量化和表征。在实验室中,试验在室温下进行,并且进行两次,结果具有可比性。

除了使用由0.1%TritonX-100\/花穗修正的1mL磷酸钾缓冲液单独加工花穗之外,如在约胡姆(Jochum)等人(2006)中描述的,量化来自小麦花穗的芽孢杆菌孢子群落。通过如在克兰(Crane)等人,(2013)中所述估算呈休眠孢子的芽孢杆菌属细胞的百分比,并且提供于表4中。

表4.在植物表面的孢子萌发。w<\/sup>

w<\/sup>将AGFK或缓冲液施用至用水或TrigoCor孢子预处理的小麦花穗,然后将花穗置于湿度箱中24h。在萌发剂和湿度处理之前和之后估算处于休眠孢子形式的芽孢杆菌属群落数和CFU百分比。所示出的数值表示平均值±标准差。

x<\/sup>通过热处理来自制备的稀释系列的样品估算休眠孢子以量化群落水平。列为<1的样品在稀释物(这些稀释物产生约100CFU的预热处理)热处理后一致地不具有可检测出的CFU。

y<\/sup>在HEPES缓冲液中的L-天冬酰胺、D-葡萄糖、D-果糖、以及氯化钾(100mM)的等摩尔溶液。

z<\/sup>HEPES缓冲液。

如表4所示,在处理之后芽孢杆菌属的群落增加,并且在AGFK的存在下,相比于对照具有增加的群落。对用TrigoCor预处理的小麦花穗施用AGFK比施用缓冲液一致产生了在小麦花穗上休眠孢子百分比的较大的下降,表明AGFK处理增强了小麦表面的孢子萌发。

引用的文献

克兰(Crane),J.M.,D.M.吉布森(Gibson),R.H.沃恩(Vaughan),和G.C.伯格斯特龙(Bergstrom),2013,小麦花穗上的伊枯草菌素水平与解淀粉芽孢杆菌引起的赤霉病的生物防治相关(IturinlevelsonwheatspikeslinkedtobiologicalcontrolofFusariumheadblightbyBacillusamyloliquefaciens),植物病理学(Phytopathology)103(2):146-155。

约胡姆(Jochum),C.C.,L.E.奥斯本(Osborne),和G.Y.袁(Yuen)2006,用产酶溶杆菌菌株C3进行赤霉病生物防治(FusariumheadblightbiologicalcontrolwithLysobacterenzymogenesstrainC3),生物防治(BiologicalControl)39(3):336-344。

尼科尔森(Nicholson),W.L.,和P.塞特洛(Setlow),1990,孢子形成、萌发和生长(Sporulation,germinationandoutgrowth),在芽胞杆菌属分子生物学方法(MolecularBiologyMethodsforBacillus)中,C.R.哈伍德(Harwood)和S.M.卡廷(Cutting)编辑;约翰·威利父子出版公司(JohnWiley&SonsLtd)。

杨婉婉(YangWan-Wan),和艾德里安庞塞(AdrianPonce),2009,生孢梭菌孢子内生孢子存活率快速测定(RapidendosporeviabilityassayofClostridiumsporogenesspores),国际食品微生物学杂志(InternationalJournalofFoodMicrobiology)133(3):213-216。

伊轩(YiXuan),和彼得塞特洛(PeterSetlow),2010,芽孢杆菌属物种孢子萌发中定型步骤的研究(StudiesofthecommitmentstepinthegerminationofsporesofBacillusspecies),细菌学杂志(JournalofBacteriology)192(13):3424-3433。

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